潘芸，高丽华，邵勇，王友亮，高招刚，段海峰，胡显文

    hDll1ext-Fc融合蛋白的表达纯化与初步鉴定

    潘芸，高丽华，邵勇，王友亮，高招刚，段海峰，胡显文

    230601 合肥，安徽大学生命科学院(潘芸、高招刚)；100071 北京，军事医学科学院生物工程研究所(高丽华、邵勇、王友亮、胡显文)，放射与医学研究所(段海峰)

    获得高效表达 hDll1ext-Fc 融合蛋白的细胞系以及具有生物学活性的目的蛋白。

    根据已知序列设计引物，并将 hDll1ext基因片段经 PCR 扩增，酶切后连接至 pIRES2-EGFP-Fc 中，挑选阳性克隆测序，将正确的重组质粒转染至 CHO-S 细胞，筛选高表达细胞系，利用 rProtein A 亲和柱纯化目的蛋白，并通过检测 Notch 下游信号分子 Hes1 的表达及双荧光素酶报告基因实验检测蛋白活性。

    构建了 pIRES2-EGFP-hDll1ext-Fc 真核表达载体，并筛选了高效表达 hDll1ext-Fc 的 CHO-S 细胞系，纯化得到较高纯度的融合蛋白，配合生物活性检测实验显示，可溶性的 hDll1ext-Fc 能够激活 Hes1 报告基因，并且能上调 Notch 下游分子 Hes1 的表达，证明其能够激活 Notch 信号通路。

    在 CHO-S 细胞中成功表达了 hDll1ext-Fc 融合蛋白，为进一步研究 Delta-like-1 的生物学功能奠定重要基础。

    配体，Notch； CHO 细胞； Delta-like； Fc融合蛋白

    基因首先在果蝇体内发现，由于该基因的缺失会导致果蝇翅膀边缘出现缺口(notch)而得名。Notch 信号传导通路广泛存在于脊椎与非脊椎动物体内，它是决定细胞命运的重要路径之一[1]。Notch 受体是由胞外区(extracellular Notch，ECN)和跨膜区/胞内区(Notch transmembrane，NTM)两个亚基组成的异二聚体，两者是通过共价键结合在一起的，并具有 Ca2+依赖性。果蝇中有2 种 Notch 配体，Delta 和 Serrate。线虫中 Notch 配体有 Lag2。哺乳动物中有多重 Notch 配体，与 Delta 高度相似的配体称为 Delta 或 Delta 样(Delta-like，Dll)，与 Serrate 相似的称为 Serrate 或 Jagged。目前发现人的 Notch 配体共有 5 种，即 Delta-like-1、Delta-like-3、Delta-like-4、Jagged1、Jagged2 ......