张群，庞国进，刘天会，王萍，马雪梅，尤红，丛敏

    mRNA 发生特异性降解，导致靶基因表达抑制或沉默，引起相应的功能表型缺失，属于转录后的基因沉默机制[1-2]，在各个领域的特定基因沉默研究中应用广泛[3]。双链 RNA 即小干扰 RNA(small interfering RNA，siRNA)，通过引入双链 RNA 引发特定靶基因沉默，比基因敲除技术更方便、快捷地显示出基因的功能，已成为分子生物学领域最热门的研究课题之一[4-5]。

    T 淋巴细胞是发挥机体免疫功能最重要的一大细胞群，具有促进或者调节机体细胞免疫及体液免疫的功能。通过 siRNA 的方法干扰人外周血原代 T 淋巴细胞特定基因的表达，从而抑制 T 淋巴细胞相应的功能或表型，对于研究 T 淋巴细胞特定基因的功能以及对 T 淋巴细胞功能的临床干预等具有重要意义。但是，人外周血 T 淋巴细胞属于原代悬浮细胞，化学合成的 siRNA 转染进入细胞的转染效率较低[6]。已有研究报道可采用Lipofectamine 2000 和 Lipofectamine RNAiMAX将化学合成的 siRNA 转染进入原代细胞或悬浮细胞[7-9]。FuGENE6、Hiperfect 和 EntransterTM-R 依其试剂盒说明书也可进行原代细胞 siRNA 的转染。为探讨不同转染试剂的转染效率，我们采用上述 5 种转染试剂介导荧光标记的对照 RNA 转染人外周血 T 淋巴细胞，筛选出介导 RNA 转染人外周血 T 淋巴细胞效率较高的转染试剂EntransterTM-R，证明其能够有效介导人工合成RNA 转染人外周血原代 T 淋巴细胞，可作为今后进行特定基因的 siRNA 转染原代 T 淋巴细胞的实验依据。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象和材料

    1.1.1 对象 本研究共采集 10 例健康志愿者，由同例志愿者的 T 淋巴细胞完成同组实验，所有实验均通过医院伦理委员会批准并取得献血者的知情同意书。

    1.1.2 主要试剂 RPMI 1640 培养基和胎牛血清均购自美国 Gibco 公司；淋巴细胞分离液(Ficoll液)购自美国 GE Health 公司；人 T 细胞富集液购自美国 Stem Cell 公司；CD3 抗体购自美国BD 公司；荧光标记的 siRNA BLOCK-iT? Alexa Fluor?Red Fluorescent Oligo(对照 RNA)，转染试剂 Lipofectamine 2000、RNAiMAX 均购自美国 Invitrogen 公司；转染试剂 FuGENE6 购自美国Promega 公司；Hiperfect 购自德国 Qiagen 公司；转染试剂 EntransterTM-R 购自英格恩生物公司 ......