张许萌，王林林，任浩，何琪杨，陈汝贤，解云英

    以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的基因表达上调剂筛选模型的建立与初步应用

    张许萌，王林林，任浩，何琪杨，陈汝贤，解云英

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学室

    建立以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的高通量筛选模型，用于胰岛新生相关蛋白基因表达上调剂的筛选。

    以叙利亚金黄地鼠基因组 DNA 为模板扩增胰岛新生相关蛋白核心启动子序列，克隆至pGL4.17 质粒载体构建重组质粒。采用脂质体介导的方法将重组质粒和内参质粒 pRL-TK 共转染金黄地鼠胰岛 β 细胞 HIT-T15，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶的表达活性。对瞬时转染条件进行优化，以豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯作为阳性对照来评价模型的有效性，并利用该细胞模型对本研究所的化合物库进行筛选。

    构建了重组荧光素酶报告基因质粒 pGL4.17-INGAP，并成功转染 HIT-T15 细胞株。对模型进行优化后，应用阳性对照对其进行评价，Z' 因子为 0.57，适用于进行高通量筛选。用该模型筛选了本所化合物库，其中白藜芦醇显示出较好的上调作用，EC50为 1.6 μg/ml。

    成功建立了以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的基因表达上调剂筛选模型。

    转录启动子； 药物评价，临床前； 胰岛新生相关蛋白

    糖尿病是以高血糖为主要特征的代谢性疾病，并伴有严重的并发症，降低了患者的生活质量[1]，胰岛 β 细胞过度凋亡、功能减退是糖尿病发病的重要环节[2]。研究发现，在胰腺发生发育过程中，将健康胰腺部分切除或胰管结扎后，某些诱发因子能够刺激胰腺导管前体细胞分化成胰岛 β 细胞，胰岛功能可以通过 β 细胞再生得以部分恢复，这一过程即胰岛新生[3-4]。

    基础研究已发现了一些诱发胰岛新生的先导物，其中胰岛新生相关蛋白(islet neogenesis associated protein，INGAP)是在寻找具有胰岛新生活性的内源性分子过程中发现的第一个治疗性候选物[5]，在胰岛新生过程中发挥着重要作用。已有动物实验表明，INGAP 能够促进 β 细胞的增殖，逆转I型糖尿病大鼠的高血糖症状[5-6]；另外，相关II期临床研究证明，INGAP 能够促进内源性胰岛素分泌，改善血糖控制[7]。因此，INGAP 是一个潜在的安全有效的糖尿病治疗新靶点。

    本研究以 INGAP 基因启动子为靶点，建立以细胞为基础的、能够检测其转录活性的筛选模型，以期发现能够特异性上调 INGAP 表达的活性化合物 ......