金国贤，孙斌，金硕，曲连军，张瑜

    目前对乙型肝炎慢性化的传统治疗方法多采用恩替卡韦等抗病毒药物，通过降解病毒 mRNA直接抑制肝细胞中的病毒复制，并间接刺激免疫系统，但病毒的清除率较低，而其他抗病毒药物虽有效抑制病毒复制但持续时间短，易出现反弹[1]。树突状细胞(dendritic cell，DC)能够刺激机体针对外界病原体的入侵产生足够的免疫反应，我院在传统抗病毒治疗的基础上联合自体 DC 对 HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)进行治疗并与单纯抗病毒治疗效果进行对比，探讨联合自体 DC 治疗效果是否优于单纯抗病毒药物，结果报告如下。

    1 对象与方法

    1.1 对象与材料

    1.1.1 研究对象及分组 选择 2010年 8月 –2012年 7月间在我院肝炎门诊确诊的 HBeAg 阳性的 CHB 患者 126 例，17～56 岁，平均 30.2 岁，其中男性 82 例、女性 44 例，CHB 病程 1 ～9年，平均 3.7年，患者持续 HBsAg、HBeAg 及HBV DNA 阳性，其定量高于 105拷贝?ml，ALT >80 IU/L，不合并肝硬化和其他肝炎病毒感染及其严重并发症。126 例患者随机分为治疗组 75 例和对照组 51 例，两组生化指标和 HBV DNA指标相似。治疗组获得本院伦理委员会批准[批准号2010.07 伦审第(32)]和患者签署的知情同意书，采用自体 DC 联合恩替卡韦治疗，对照组仅用恩替卡韦治疗。

    1.1.2 实验试剂 RPMI 1640 培养液、rhGM-CSF、rhIL-4、TNF 购自达科为生物科技有限公司；鼠抗人 CD80、CD86、HIA-DR 购自北京利文生物科技有限公司。

    1.1.3 实验仪器 倒置显微镜为日本 Olympus公司产品；CO2培养箱为日本三洋公司产品；流式细胞仪和细菌培养仪均为美国 BD 公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 DC 细胞的获得 无菌条件下抽取患者静脉血 50 ml，肝素抗凝。用蘸有 75% 酒精的纱布擦拭静脉血容器拿至生物安全柜内，盐水 1∶1 稀释抗凝血，缓慢加入淋巴细胞分离液，2000 r/min 离心 20 min，分离单个核细胞吸取细胞层后稀释，用1600 r/min 离心 11 min ......