Hilary Sherman，Pilar Pardo，Todd Upton

    细胞的迁移性，趋化性和侵袭性的检测方法

    Hilary Sherman，Pilar Pardo，Todd Upton

    200040 上海，康宁生命科学亚洲技术中心

    细胞的迁移性，是指细胞受到外来信号的刺激，由一个地方迁移到另一个地方的特性，通常发生在比如伤口愈合、细胞分化、胚胎发育和肿瘤转移的过程中。细胞的侵袭性和迁移性相似，但不同的是，发生侵袭时，细胞需要降解一层胞外基质(ECM)或者基底膜基质(BME)进而迁移到一个新的地方。当正常细胞发生炎症反应，或者肿瘤细胞发生转移时都需要细胞的侵袭性。由此可见，了解这些特性的发生机制，对整个生物学研究有着重要而深远的意义。

    由康宁公司研发的 transwell 培养设备的出现，为在体外研究细胞的趋化性和侵袭性提供了一种相对简便的方法。通常的侵袭检测系统是由胶原蛋白、纤连蛋白、层黏连蛋白等复杂的胞外基质和基底膜基质组成。还有更复杂的检测手段是在复合蛋白层膜上培养单层表皮细胞。将分泌多种生长因子的细胞培养在可渗透层膜上作为趋化源的系统，也可以用于趋化性检测或者更繁杂的侵袭性检测。

    下面所述的方法步骤是基于 BME 层膜的细胞侵袭性检测，附以趋化性检测为例(对于不含 BMC 和 ECM 层膜的侵袭性检测也遵循类似的方法)。这里具体列出了以康宁 96 孔transwell 设备为例的实验参数。对于不同规格的系统可以根据下面表格中的数据调整材料或试剂的用量。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系 非侵袭性 MCF-7 细胞系(人类乳腺癌细胞)、侵袭性 HT1080 细胞系(人类纤维肉瘤细胞)均购自美国 ATCC。

    1.1.2 检测平板类型 8 μm 孔径的 96 孔 HTS transwell 培养系统、96 孔黑板、96孔黑色固相微型板、8 μm 孔径的 6 孔transwell 培养系统、12 μm 孔径的 12 孔 transwell 培养系统、8 μm 孔径的 24 孔 transwell 培养系统、超低黏附 6 孔和 24 孔平板均为康宁公司产品。

    1.1.3 试剂 5 × 基底膜提取物(BME)包被溶液、10 × 包被缓冲液、10 × 细胞裂解液均为美国 Trevigen 公司产品；用来消化收集细胞的HyQtase 消化液购自美国 Hyclone 公司；Calcein AM 钙荧光素乙酰氧基甲酯(分子探针)以 1.67 μg/ml 的浓度溶解在 DMSO 中；含有 10% 胎牛血清的 IMDM 培养基、不含血清但含有 1 × ITS 的 IMDM 培养基购自美国 Invitrogen 公司 ......