万晓珊，刘彦隆，张翼，肖业臣，张海淼，许竹梅，肖健

    内质网应激对3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子21 mRNA表达的调节作用

    万晓珊，刘彦隆，张翼，肖业臣，张海淼，许竹梅，肖健

    325035 温州医科大学药学院(万晓珊、刘彦隆、张翼、肖业臣、许竹梅、肖健)；430075 武汉华大医学检验所有限公司(张海淼)

    在 mRNA 水平探讨内质网应激对 3T3-L1 脂肪细胞成纤维细胞生长因子 21 表达的影响。

    利用经典鸡尾酒法诱导 3T3-L1 前脂肪细胞分化，再用毒胡萝卜内酯分别按照剂量梯度(0、6.25、12.5、25、50 和 100 nmol/L)和时间梯度(0、1、3、6 和 12 h)进行处理，实时 PCR 检测内质网应激相关蛋白C/EBP 同源蛋白和葡萄糖调节蛋白 78 以及成纤维细胞生长因子 21 mRNA 的表达水平。

    毒胡萝卜内酯能诱导分化成熟的 3T3-L1 脂肪细胞发生内质网应激，促进 C/EBP 同源蛋白、葡萄糖调节蛋白 78 和成纤维细胞生长因子 21 mRNA 水平显著升高，且与毒胡萝卜内酯的剂量和处理时间呈正相关。当用 100 nmol/L毒胡萝卜内酯处理 6 h 后，成纤维细胞生长因子 21 mRNA 水平显著增高，为对照组的 114.55 倍(1 材料与方法

    1.1 材料

    小鼠前脂肪细胞株 3T3-L1 购于美国菌种保藏中心(ATCC)；高糖 DMEM 培养基、RPMI 1640 培养基、胎牛血清(FBS)、实时 PCR 试剂盒购于美国 Invitrogen 公司；重组人胰岛素、地塞米松(dexamethasone，Dex)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(isobutyl methylxanthine，IBMX)和毒胡萝卜内酯购于美国 Sigma 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 小鼠 3T3-L1 脂肪细胞的培养和分化 用含 10% FBS 的高糖 DMEM 培养基培养和维持 3T3-L1 前脂肪细胞，用经典鸡尾酒法诱导其分化。当细胞长至接触抑制 2 d 后，用分化液I(含 10 mg/L 胰岛素、0.25 μmol/L Dex、0.5 mmol/L IBMX、10% FBS 的高糖 DMEM 培养基)培养2 d，再用分化液II(含 10 mg/L 胰岛素、10% FBS 的高糖 DMEM 培养基)培养 2 d，之后用含 10% FBS 的高糖 DMEM 培养基继续培养，每 2 天换液一次 ......