吴凤麟，韦嘉灝，贾筠，何免，邵红伟，黄树林

    一种基于TIL的肿瘤相关抗原特异性T细胞的筛选方法

    吴凤麟，韦嘉灝，贾筠，何免，邵红伟，黄树林

    510006 广州，广东药学院生命科学与生物制药学院(吴凤麟、韦嘉灝、何免、邵红伟、黄树林)，生物制药研究所(吴凤麟、邵红伟、黄树林)，广东省生物技术候选药物研究重点实验室(吴凤麟、邵红伟、黄树林)；523059 东莞市人民医院肿瘤内科(贾筠)

    Wolfl 等[1]的研究建立了一种以 CD137 为表面标记，从人 CD8+T 细胞中快速鉴定和分离抗原特异性 T 细胞的方法。由于 CD137 分子表达于活化的 CD4+和 CD8+T 细胞表面[2]，其表达上调依赖于 T 细胞经抗原刺激后活化，并可在抗原刺激后 12 h ~ 5 d 内持续表达[3]。因此可以 CD137 为标记，从 T 细胞中检测和分离比例较低的抗原特异性 T 细胞。

    上述研究主要从健康人外周血单核细胞(peripheral blood monocyte，PBMC)中筛选 CD137+抗原特异性 T 细胞。然而由于成熟的外周血 T 细胞经历了胸腺的阴性选择，其 T 细胞抗原受体(T cell receptor，TCR)对自身抗原肽(接近肿瘤抗原肽)/MHC 复合物的亲和力低下[4]，限制了以健康人 PBMC 筛选肿瘤抗原特异性 T 细胞的效率。因此，有必要寻找更理想的肿瘤抗原特异性 T 细胞筛选来源，这一来源应较为确定地含有可识别肿瘤相关抗原的 T 细胞亚群。

    国外临床研究结果提示，肿瘤局部浸润的记忆性 T 细胞数量，与患者的预后和转归有明显相关性[5]。提示肿瘤浸润记忆性 T 细胞可在局部识别肿瘤抗原进而发挥抗肿瘤免疫效应。尤其是记忆性 T 细胞中的中枢型记忆性 T 细胞(central memory T cell，TCM)亚群可在体内长期存活，并保持其抗原特异性[6]。因此，来源于肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)中的记忆性 T 细胞，特别是 TCM有望为肿瘤抗原特异性 T 细胞提供更高效的筛选来源。

    本实验首先从肝癌患者腹水 TIL 中纯化获得含有 TCM成分的 CD8+CD62L+T 细胞。选择 CD62L 为纯化标志的理由是：①CD62L 是初始 T 细胞和 TCM的共同标记。经 CD62L 纯化可排除已经抗原刺激活化，但抗原特异性未知的活化 T 细胞和效应型记忆性 T 细胞(effector memory T cell ......