曹晓培，肖凤君，高瞻，杨月峰，张群伟，王立生，王恒湘，王华

    重组腺病毒Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系感染效率的比较研究

    曹晓培，肖凤君，高瞻，杨月峰，张群伟，王立生，王恒湘，王华

    目的 以 Ad5-GFP及 Ad5/F35-GFP为对照，评价Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系的感染效率。

    方法 制备并纯化Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP及Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒，以不同的感染复数(MOI)感染乳腺癌细胞系 SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系 786O。48 h后，荧光显微镜观察 GFP的表达，流式细胞仪检测感染效率及不同细胞表面柯萨奇腺病毒受体(CAR)、CD46和桥粒芯糖蛋白质 2的表达。

    结果 Ad5/F35-GFP对 SKBR-3、MCF-7及 786O均具有很高的感染效率，且其在较低的 MOI时就具有较高的感染效率；Ad5/F11p-GFP对 CD46高表达的 MCF-7及 786O具有较高的感染效率，5 MOI感染即可达到 60%以上的感染效率；而Ad5-GFP仅对 CAR高表达的细胞系 786O具有较高的感染效率，且感染效率随着 MOI的增加而升高。Ad5/F11p-GFP和 Ad5/F35-GFP对三种肿瘤细胞系的感染效率明显高于Ad5-GFP。

    结论 对 5型腺病毒进行纤维顶球的改造，可增强对肿瘤细胞的感染效率。

    5型腺病毒； 纤维顶球； 感染效率； 柯萨奇病毒-腺病毒受体； 抗原，CD46； 桥粒芯糖蛋白质2

    腺病毒具有宿主范围广、安全、基因转移效率高、制备方便等优点，广泛应用于肿瘤的基因治疗[1-2]。目前基因治疗多以 5型腺病毒为载体，其感染效率与细胞表面的柯萨奇腺病毒受体(CAR)密切相关[3]，但在一些肿瘤细胞，特别是晚期和转移的肿瘤细胞表面，CAR受体的表达往往下调，因此，限制了其在基因治疗中的广泛应用。腺病毒主要是通过纤维顶球和细胞表面的受体相结合而进入细胞，因此，为克服上述缺陷，研究者们试图通过改造 5型腺病毒载体的纤维顶球，籍以提高对肿瘤细胞的感染效率[4]。Ad11和 Ad35型腺病毒属于 B组腺病毒，主要通过识别 CD46分子感染细胞[5-7]。因此，本研究利用本课题组鲁茁壮博士改构的 Ad5与 Ad11的嵌合载体 Ad5/F11p-GFP以及对照病毒 Ad5-GFP、Ad5与 Ad35的嵌合载体 Ad5/F35-GFP感染不同的肿瘤细胞，检测其基因转移效率，以期为基因治疗提供实验依据。

    1 材料与方法 ......