脱细胞半月板细胞外基质对半月板细胞的影响
盖玻片,1材料与方法,2结果,3讨论
郭维民,刘舒云,高钺,黄靖香,彭江,汪爱媛,王玉,卢世璧,郭全义脱细胞半月板细胞外基质对半月板细胞的影响
郭维民,刘舒云,高钺,黄靖香,彭江,汪爱媛,王玉,卢世璧,郭全义
目的 探讨脱细胞半月板细胞外基质(dMECM)对传代半月板细胞增殖、细胞活性以及细胞表型的影响。
方法 用 CCK-8 法检测 dMECM 对半月板细胞增殖的影响;将 P3代的内侧半月板纤维软骨细胞种植在 dMECM修饰盖玻片上,以未修饰盖玻片为对照,体外培养 7、14 d后进行细胞活性检测,糖胺多糖、胶原分泌含量测定并用RT-PCR 检测半月板细胞特异性基因 mRNA 表达变化。
结果 CCK-8 结果证实,与对照组比较,生长在 dMECM修饰盖玻片上的 P3代兔半月板纤维软骨细胞具有更好的细胞增殖特性(P < 0.05);细胞死/活染色结果证实 dMECM组可维持更好的细胞活性;糖胺多糖和胶原定量检测结果证实 dMECM 组在第 7、14 天时,比对照组分泌更多的糖胺多糖和胶原(P < 0.05)。RT-PCR 的检测结果证实体外培养7、14 d 时,dMECM 组 II 型胶原 mRNA 表达显著上调(P < 0.05)。
结论 dMECM 可以很好地促进半月板纤维软骨细胞的增殖、分化以及细胞活性的维持,可能是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料之一。
细胞外基质; 关节半月板; 组织工程; 生物相容性材料; 脱细胞; 纤维软骨细胞
半月板损伤是膝关节的常见损伤之一。因半月板内侧区域无神经、血管,若发生损伤,往往难以自愈,倾向于永久性的创伤后退变[1]。半月板组织工程技术给半月板损伤治疗带来了新的希望[2]。一般而言,半月板组织工程主要由种子细胞、支架、生物学或生物力学刺激三部分构成[3]。在半月板支架材料领域,采用脱细胞技术制备的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)生物材料,因其可以有效去除移植免疫源性物质,保留 ECM 成分及其生物活性物质而受到了广泛关注[4]。ECM 支架材料类似于天然半月板的细胞外基质成分,与其他传统材料相比,具有为种子细胞提供生长、分化的天然微环境的优越性,有利于更好地构建组织工程半月板。前期我们实验室尝试通过纯物理的方法(湿法粉碎、差速离心)制备新型的脱细胞半月板细胞外基质(decellularized meniscal extracellular matrix,dMECM)材料。实验结果证实,dMECM 可以很好地保留半月板天然的细胞外基质成分 ......
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