徐峰，刘舒云，王鑫，彭江，卢世璧，袁玫，许文静，郭全义

    流式分析人脂肪组织中血管周围干细胞含量的方法探究

    徐峰，刘舒云，王鑫，彭江，卢世璧，袁玫，许文静，郭全义

    目的 建立人脂肪组织中分离血管周围干细胞(PSCs)的方法，并研究其在脂肪组织细胞中所占的比例，为血管周围干细胞作为骨和软骨组织工程新的种子细胞奠定基础。

    方法 取人的脂肪组织分别用 I 型胶原酶和 II 型胶原酶消化得到血管基质成分(SVF)，用细胞计数仪及流式细胞仪检测 SVF 中细胞密度、活细胞比例和 PSCs 细胞所占的比例。

    结果 用细胞计数仪分析得出用 II 型胶原酶消化脂肪组织所得到的 SVF 中活细胞比例更高，且差异具有统计学意义(P < 0.01)，而细胞密度有增高趋势(P = 0.18)。用流式细胞仪检测得出使用 II 型胶原酶消化脂肪组织所得 SVF 中 PSCs 比例更高，且差异具有统计学意义(P < 0.01)。使用 I 型胶原酶消化每 10 ml 脂肪组织中可以分离得到PSCs 活细胞为(7.98 ± 2.38)× 105个，使用 II 型胶原酶消化则每 10 ml 脂肪组织中可以分离得到 PSCs 活细胞为(16.68 ± 4.56)× 105个。

    结论 使用 II 型胶原酶消化脂肪组织可以得到更多的血管周围干细胞 PSCs，其在脂肪组织中的含量可以满足骨和软骨损伤后自体细胞移植修复的需要。

    血管周围干细胞； 流式细胞术； 种子细胞

    干细胞作为组织工程的种子细胞是再生医学中重要的组成部分，目前应用于骨和软骨组织工程领域的种子细胞主要有骨髓干细胞[1]和脂肪干细胞[2]等，然而从目前常用方法分离出的干细胞往往不纯净和不均一[3-4]，从而影响了其应用的效果，寻找来源较方便，获得量大且较纯的间质干细胞是目前组织工程研究的重要内容。

    目前国家卫计委医疗管理规范不允许干细胞体外扩增后应用于临床，而从患者自体脂肪组织中分离的未经体外扩增的干细胞按照政策却可以应用于临床。最近被人们认识并大量研究的一种新型干细胞——血管周围干细胞(perivascular stem cells，PSCs)成为了骨和软骨组织工程种子细胞新的选择，其在患者脂肪组织中直接大量分离后有望应用于临床治疗中且符合国家政策[5-6]。血管周围干细胞 PSCs 被认为是纯净的间充质干细胞[7-8]，其包括两种不同的干细胞亚群[8-9]，分别为存在于毛细血管等最小血管周围的血管外周细胞和存在于较大血管周围的血管外膜细胞。血管外周细胞的细胞表面标记为 CD146+、CD45-、CD34-；血管外膜细胞的表面标记为 CD146-、CD45-、CD34+ ......