李雪虹，宫世强，韩小婉，司书毅，王艳宏

    BMP-2表达上调剂的筛选及其抗骨质疏松活性研究

    李雪虹*，宫世强*，韩小婉，司书毅，王艳宏

    目的 筛选上调骨形态发生蛋白 2(BMP-2)表达的新型小分子活性化合物，为研发抗骨质疏松药物提供先导化合物。方法 应用国家新药(微生物)筛选实验室前期建立的BMP-2 表达上调剂的高通量筛选模型，对化合物库中10 000 余个化合物进行筛选，以染料木素作为阳性对照；应用实时定量 PCR 和 Western blot 方法检测活性化合物对 U-2OS 细胞 BMP-2 mRNA 和蛋白表达水平的影响。在mRNA 水平考察了活性化合物对 Runx2 表达的影响，Western blot 法检测活性化合物对 Smad1/5/8 蛋白磷酸化水平的影响；用 PNPP 法检测碱性磷酸酶活性，验证活性化合物体外促进成骨细胞分化的作用。

    骨质疏松； 高通量筛选； 骨形态发生蛋白质 2

    随着我国步入老龄化社会，骨质疏松的发病率越来越高[1]，研究和开发更为安全有效的防治骨质疏松药物已成为当今的研究热点。骨质疏松发病的本质是骨代谢的失衡，骨代谢包括骨形成与骨吸收，前者由成骨细胞主导，后者由破骨细胞主导。当破骨功能强于成骨功能，将导致骨质疏松的发生[2]。近年来的大量研究证明，增强成骨细胞的作用，改善骨质形成代谢，促进骨质的形成是治疗骨质疏松新的且更为重要的途径。

    骨形态发生蛋白 2(BMP-2)是骨形成蛋白家族成员之一，主要通过 Smads 通路来调控细胞成骨分化，在成骨细胞分化过程中有着非常重要的作用。BMP-2 可以直接促进成骨细胞的分化[3]，同时能够增加成骨细胞标志基因 OPN、Runx2、BSP、ALP 等的表达[4-5]。BMP-2 作为骨形成诱导因子可以成为骨质疏松治疗的重要靶点。

    国家新药(微生物)筛选实验室在前期工作中成功构建了表达小鼠 bmP2 上游调控序列-荧光素酶报告基因的稳定转染细胞模型，并且证明其可以用于抗骨质疏松药物的筛选。本研究在此基础上，以 BMP-2 为靶点，对国家新药(微生物)筛选实验室化合物样品库进行筛选并对筛出的活性化合物进行体外抗骨质疏松活性研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株 人骨肉瘤细胞株 U-2OS 购于中国医学科学院基础医学研究所细胞中心；C3H10T1/2细胞由中国医学科学院医药生物技术研究所王真老师馈赠；表达小鼠 bmP2 上游调控序列-荧光素酶报告基因的稳定转染细胞株 BMP2-Luc MC3T3细胞 ......