鞠瑞，陈玮，陈晨，郭磊，李娟，叶菜英，张德昌

    利用四唑盐染料WST反映巨噬细胞受脂多糖刺激活化后的氧化应激和代谢变化

    鞠瑞，陈玮，陈晨，郭磊，李娟，叶菜英，张德昌

    目的 通过四唑盐染料显色方法分析巨噬细胞受脂多糖刺激后的氧化应激和代谢变化，分析这种方法在炎症研究中的应用价值。

    方法 通过活细胞计数方法和 CCK-8 检测试剂分别检测RAW264.7 巨噬细胞的活力；用 CCK-8 和 WST-1 显色方法研究超氧阴离子的释放；用 DCFH-DA 荧光染色和流式细胞术检测细胞内活性氧的生成；用乳酸检测试剂盒和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 NAD+(H) 检测试剂盒分别检测上清中乳酸和细胞内 NADH 的含量。

    结果 经脂多糖刺激的 RAW264.7 细胞的活细胞计数结果和 CCK-8 显色结果存在反差；相同数目的正常培养细胞和脂多糖刺激细胞的 CCK-8 显色比较，后者读数显著升高，超氧化物歧化酶能够下调 CCK-8 显色读数，WST-1 显色结果与 CCK-8 一致，脂多糖刺激细胞中的活性氧含量显著增加；脂多糖导致 RAW264.7 细胞上清中的乳酸含量和细胞内的 NADH 含量显著增加。

    结论 应用 WST 染料测定经脂多糖刺激的 RAW264.7细胞活力时，测定结果会受到细胞中还原性物质——超氧阴离子和 NADH含量变化的干扰。通过 WST-1 或 WST-8显色实验，可验证脂多糖能够刺激 RAW264.7 巨噬细胞发生氧化应激和能量代谢变化。这一显色实验在炎症研究和药物筛选中可能有重要应用价值。

    脂多糖类； 氧化性应激； 能量代谢； 四唑盐染料

    四唑盐是一种被广泛用于细胞活性、细胞代谢和超氧化物检测的重要试剂。噻唑蓝(MTT)是检测细胞活性的常规试剂之一，其检测原理是大部分MTT 可被细胞内还原型的吡啶核苷酸——辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)还原，从而间接反映细胞活力。近年来，第二代四唑盐——水溶性四唑盐(WST)得到广泛应用。与 MTT 相比，WST (WST-1 或 WST-8)主要有两个特点，一是不可通过细胞膜，二是被还原生成的甲瓒为水溶性物质。其中 WST-1 是 WST 系列的第一个四唑盐试剂，WST-8 相比 WST-1 更加稳定，灵敏度更高，溶解性更强。由于 WST 不可通过细胞膜，如果在没有中间电子载体 1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯盐(1-mPMS)的情况下显色，则是因为被释放至细胞外的超氧阴离子还原，可反映细胞超氧阴离子的释放和呼吸爆发情况；如果在 1-mPMS 存在的情况下显色 ......