钱雯，马波，黄永坤，陈敏，王丽丽，张益丽，杨晨，徐道俊，刘馨

    临床样品中不同蚀斑表型单克隆轮状病毒VP8基因序列分析

    钱雯，马波，黄永坤，陈敏，王丽丽，张益丽，杨晨，徐道俊，刘馨

    作者单位：650106 昆明，云南沃森生物技术股份有限公司(钱雯、马波、陈敏、王丽丽、张益丽、杨晨、徐道俊、刘馨)；650032 昆明医学院第一附属医院(黄永坤)

    轮状病毒属于呼肠孤病毒属，为没有包膜的双链 RNA病毒，人畜禽共患，其感染每年引起约 50 万婴幼儿死亡[1]。

    宿主细胞表面的寡糖分子是一个重要的因子，它们与轮状病毒和细胞的相互识别及吸附有关，同时还影响了病毒的宿主特异性[2]。研究表明，轮状病毒外壳蛋白 VP4 的糖类结合区域位于 VP4 的亚基 VP8，其与细胞表面寡糖分子的相互作用使病毒识别并吸附到细胞表面。轮状病毒对细胞的感染是通过 VP8 与细胞表面多糖，尤其是与内部唾液酸(N-acetyl- and N-glycolylneuraminic acids，Sia)的结合完成的[3]。人株、猴株以及猪轮状病毒 VP8 基因序列在识别细胞表面唾液酸或其衍生物甲基-α 二氮乙酰神经氨酸的位点有显著的差异[1]，影响病毒在细胞培养上的敏感性和适应性。

    研究发现，分离自猪粪便的轮状病毒在 157 位呈现出Pro 或者 Ser 的多态性；牛轮状病毒株 NCDV 随细胞培养的适应，VP8 基因 157 位由 Pro 突变为 Ser，从而产生了NCDV Cody 和 NCDV Lincoln 两个衍生亚株，这是在VP8 氨基酸 64 ～ 224 区域内发生的唯一的氨基酸突变[4]。分离自人粪便样品轮状病毒的 VP8 基因是否存在上述位点的多态性？

    轮状病毒感染细胞后可形成蚀斑，在凝胶的固定下，病毒颗粒不能自由地移动，在一个病毒颗粒进入细胞并产生子代病毒的过程中，细胞死亡并形成蚀斑，一个蚀斑代表了一个单克隆的病毒分子。蚀斑的表型，即蚀斑的大小与病毒感染后产生细胞致病作用(cytopathogenic effect，CPE)的时间和程度有关，蚀斑较大的病毒克隆产生 CPE 的时间较快，也较为剧烈。VP8 基因序列的差异与空斑的大小即蚀斑表型、病毒分子的感染性之间存在怎样的关系？

    为了回答上述问题 ......