浦颖艳，孙定亚，黄爱军，曹莉

    ·论著·

    采用流式细胞术分选EAE模型小鼠小胶质细胞

    浦颖艳，孙定亚，黄爱军，曹莉

    目的获取实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠小胶质细胞，并检测其特性。

    方法取 8 周龄，雌性 C57BL/6 小鼠行 EAE 造模，待至发病高峰期(第 15 天)时以 PBS 灌注后取小鼠后脑和脊髓，切碎后加胰酶消化，消化完成后通过 100 μm 滤网滤过，而后采用 Percoll 密度梯度离心法分离获取单个核细胞，进一步利用 CD11b 与 CD45 抗体染色，通过流式细胞仪分选 CD11b+CD45high和 CD11b+CD45low细胞，即分别得到相对活化和静息的小胶质细胞，最后对流式分选获取的小胶质细胞行 qPCR 检测。

    结果通过形态比较，获得了高纯度的小胶质细胞。FIZZ-1基因行qPCR 检测，结果显示在 EAE 急性期 M2 型小胶质细胞明显增多，符合文献报道。

    结论该方法能从 EAE 小鼠体内分离获取高纯度的小胶质细胞，可用于相关目的基因后续检测。

    小胶质细胞；流式细胞术；实验性自身免疫性脑脊髓炎

    www.cmbp.net.cn中国医药生物技术， 2016， 11(4)：295-299

    小胶质细胞在中枢神经系统中约占 12%[1]，是中枢主要的固有免疫细胞。静息状态下的小胶质细胞主要发挥中枢神经系统的监视作用。中枢的病理损伤可以激活小胶质细胞，发生形态学和分子表达谱的变化，参与吞噬、抗原呈递、调节血脑屏障和调控炎症反应强度等多种作用。作为中枢神经系统主要的免疫活性细胞，小胶质细胞与神经免疫性和神经退行性疾病高度相关。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)模型是研究神经免疫性疾病——多发性硬化症(multiple sclerosis，MS)的经典动物模型。已有文献报道，在 EAE 小鼠的中枢神经系统，小胶质细胞的功能状态与 EAE 病情进展密切相关[2-4]。对于小胶质细胞基因表达的分析有助于了解其生理病理情况下的功能状态。

    目前国内对小胶质细胞的功能研究主要采用BV-2 等细胞系和体外原代培养的小胶质细胞，直接分离成年小鼠的小胶质细胞用于研究的报道较少。细胞系和体外培养的小胶质细胞与体内细胞存在一定差异，无法准确反映某一生理病理状态下小胶质细胞表型状况。目前在中枢神经系统中，CD11b+CD45+细胞群是较公认的小胶质细胞/巨噬细胞群(小胶质细胞是定植于中枢的巨噬细胞)[5] ......