张凌男，陈成，李恪梅，王国治，魏东，董巧香

    ·论著·

    布氏菌活疫苗滴鼻与皮下接种的免疫效果的比较

    张凌男，陈成，李恪梅，王国治，魏东，董巧香

    目的将布氏减毒活疫苗通过滴鼻和皮下注射两种方式免疫小鼠，比较两种方式的免疫效果。

    方法采用两种方法免疫动物，免疫 4 周后分离血清、脾脏淋巴细胞及制备肺泡灌洗液。ELISA 法检测免疫动物血清中总 IgG 抗体；ELISA 法检测免疫动物肺泡灌洗液中总IgG、IgA 抗体；ELISPOT 法检测分泌 IFN-γ、IL-4 的脾脏淋巴细胞数目，以及用 ELISA 方法检测体外再刺激后小鼠脾细胞分泌细胞因子水平；流式细胞术对 T 细胞亚群进行分类；用羊布氏菌弱毒株 M5 通过滴鼻和皮下注射两种方式攻击免疫动物，通过脾脏布氏菌计数评价并比较两种免疫方法的保护效果。

    结果ELISA、ELISPOT 和 T 淋巴细胞亚群分类结果显示，两种免疫途径均能诱导体液免疫、细胞免疫应答，两者间无显著差异。BALB/c 小鼠滴鼻攻击试验结果显示滴鼻免疫组和皮下免疫组脾脏中布氏菌数量的对数值均为 0，阴性组脾脏中布氏菌数量的对数值为 6.24 ± 0.07；皮下攻击试验显示滴鼻免疫组脾脏中布氏菌数量的对数值为 1.69 ± 0.07，皮下免疫组为 3.03 ± 0.03，阴性组为 5.29 ± 0.06。

    结论两种免疫途径均能诱导体液免疫、细胞免疫应答，滴鼻免疫组的免疫保护作用显著优于皮下注射组，提示滴鼻免疫是一种高效的免疫途径。

    布鲁杆菌菌苗；免疫，体液；免疫，黏膜；细胞免疫；接种

    www.cmbp.net.cn中国医药生物技术， 2016， 11(4)：308-313

    布氏杆菌是一种革兰阴性的不运动细菌，由苏格兰微生物学家 David Bruce 首次发现并分离[1]。因感染布氏杆菌引起的布病，是一种人畜共患性全身慢性传染病，主要侵害生殖系统，其病症类似于流行性感冒。家畜感染布氏杆菌后则极易引起流产或死胎，感染后的家畜所排出的分泌物中含有大量的布氏杆菌，具有一定的传染力。人接触了感染动物的分泌物，服用了污染的奶及灭菌不完全的畜肉，皆可遭受感染[2-4]，但人传人的现象比较罕见。据调查，很多国家由于布氏杆菌病造成的经济损失是很严重的[5]。目前，接种疫苗是世界公认的能够降低布病发生和传播最有效、最经济的方法[6]。我国目前仍采用牛种弱毒株 104M 菌株为人用皮上划痕布氏菌活疫苗，而皮上划痕弊端是不能准确定量接种，接种复杂，常伴有异常反应 ......