秦鹏，柴晓菲，王昭月，买玲，高全立

    ·论著·

    体外大量扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞及其生物学特性的初步分析

    秦鹏，柴晓菲，王昭月，买玲，高全立

    目的探讨体外大量培养扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的新方法，并初步研究其分子表型和功能特征。方法20 例手术切除的原发性肝癌组织经混合消化酶消化为单个细胞后，应用密度梯度离心法分离其中的淋巴细胞，然后应用两步培养法大量扩增 TILs，并检测它们的生长扩增速度。应用流式细胞仪检测扩增淋巴细胞的分子表型，ELISA 法检测其 IFN-γ 的分泌水平，并分析高表达 PD-1和低表达 PD-1 分子 TILs 分泌 IFN-γ 的能力。

    结果18 例标本中的 TILs 在体外经两步法培养后可以扩增达到 1010数量级。扩增的 TILs 中 CD3+细胞的比例为(91.7 ± 7.4)%，CD3+CD56+细胞的比例为(28.5 ± 11.7)%，CD3+CD4+细胞的比例为(32.5 ± 19.6)%，CD3+CD8+细胞的比例为(62.5 ± 29.1)%。PD-1 分子在 CD3+CD8+细胞的比例为(23.5 ± 16.1)%。扩增的 TILs 分泌 INF-γ 的水平为(827.8 ± 307.7)pg/ml，其中 9 例 PD-1 分子低表达的 CD3+CD8+细胞的分泌 INF-γ 的水平为(1087.5 ± 249.6)pg/ml，6 例 PD-1 分子高表达的 CD3+CD8+细胞的分泌 INF-γ 的水平为(478.6 ± 69.3)pg/ml，两者相比有明显差异(P < 0.05)。

    结论应用两步培养法从原发性肝癌中大量扩增 TILs 简便易行，扩增的 TILs 主要为 CD3+CD8+T 淋巴细胞，且TILs 中 PD-1 的表达与其分泌 IFN-γ 的能力呈负相关。

    肿瘤浸润淋巴细胞；干扰素 γ；程序性细胞死亡受体 1；原发性肝癌

    www.cmbp.net.cn中国医药生物技术， 2016， 11(4)：324-328

    原发性肝癌是在亚洲发病率很高的恶性肿瘤，我国肝癌发病率和死亡率是世界上最高的，占全球每年新发病例和死亡人数的 55%[1]。由于原发性肝癌起病隐匿，确诊时多已属中晚期，且患者对放疗和化疗均不敏感，因此治疗效果较差[2]。临床中发现个别肝癌患者单独应用免疫治疗后巨大肿块消失并能获得长期存活[3]，提示部分肝癌对免疫治疗敏感。肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)具有较强的特异性杀伤肿瘤细胞的能力 ......