高海霞，刘红芹，石琳，屈浩

    ·论著·

    基于人CD105分子的酵母展示系统的构建

    高海霞，刘红芹，石琳，屈浩

    目的构建基于人 CD105 分子的酵母表面展示系统。

    方法以人 CD105 cDNA 为模板，扩增 CD105 基因片段，转化到酵母表面展示载体 pYDs，构建 pYDs-CD105 重组质粒；将重组质粒转化酵母细胞，测序鉴定，并通过流式细胞仪分析 CD105 的表达。

    结果测序表明 CD105 基因片段转入 pYDs 质粒，流式细胞仪检测到酵母细胞表面有 CD105 分子的表达。

    结论成功构建了基于人 CD105 分子的酵母表面展示系统，为本实验室获得 CD105 单克隆抗体杂交瘤细胞株提供了新的筛选平台。

    聚合酶链反应；膜糖蛋白类；CD105；诱导；酵母表面展示

    www.cmbp.net.cn中国医药生物技术， 2016， 11(4)：329-332

    表面展示技术(surface display techniques，SDT)是一种基因表达产物和亲和选择相结合的技术，不仅可以展示小肽，还可以展示较大的蛋白[1]。展示文库常用于确定单克隆抗体的抗原表位，其中大肠杆菌表达系统的噬菌体展示系统应用最为广泛，但受其自身加工能力的限制，缺乏对表达产物的翻译后修饰功能，从而降低了获得高亲和力单克隆抗体的可能性。酵母表面展示系统是继噬菌体展示技术创立后发展起来的真核展示系统，酵母的蛋白质折叠和分泌机制与哺乳动物细胞非常相似，对人的蛋白质表达和展示更具优越性[2]。

    CD105 是一种分子量为 180 kD 的存在于细胞表面的同源二聚体跨膜糖蛋白，其胞膜外部分含有 561 个氨基酸残基，跨膜区域含有 25 个氨基酸残基，胞膜内部分含有 47 个氨基酸残基。CD105 主要表达在血管内皮细胞及相关组织上，在造血细胞、基质细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞弱表达。CD105 参与血管生成，与肿瘤的转移及预后相关，在恶性肿瘤的诊断、预后、治疗中发挥重要作用[3]。将 CD105 分子展示在酵母表面，是利用流式细胞仪快速、准确筛选 CD105 单克隆抗体的有效方法。

    1 材料与方法

    1.1材料

    1.1.1菌株酿酒酵母 EBY100 和大肠杆菌DH5α 由本实验室保存。

    1.1.2主要试剂pYDs-CD105-ring 引物和 pYDs引物由美国 Invitrogen 公司合成；M-MLV 逆转录酶购自美国 Invitrogen 公司；DNA 纯化试剂盒、高保真 Pyrobest DNA 聚合酶购自大连 Takara 公司；酵母转化及诱导试剂盒购自北京伟仑欣创生物公司；酵母质粒提取试剂盒和 anti-V5 抗体购自天根生物公司；anti-CD105-PE 单克隆抗体购自美国Beckman Coulter 公司；goat anti-mouse-IgG-FITC购自美国 Biotech 公司 ......