夏德菊，谭亚军，田霖，王珣，马霄，肖詹蓉

    ·论著·

    破伤风类毒素原液质量分析方法的研究

    夏德菊，谭亚军，田霖，王珣，马霄，肖詹蓉

    目的建立对破伤风类毒素原液进行质量分析的分子排阻色谱方法和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。

    方法分别建立分子排阻色谱方法和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对破伤风类毒素原液单体和聚体含量进行分析，并对两种方法的关键影响因素及两种方法检测结果进行评价分析。结果以含 1% 异丙醇的 pH 7.0，0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液为流动相，选取 TSK-GEL G3000SWxl 色谱柱，可以对破伤风类毒素单体、二聚体和多聚体分离，经配套软件分析得到其三个组分的相对含量；选用实验室自配的 10% 浓度的分离胶对破伤风类毒素原液进行电泳后经 Image Lab 软件分析可以对破伤风类毒素原液的单体和聚体进行纯度分析，两种方法检测结果具有可比性。

    结论建立的两种检测破伤风类毒素原液单体和聚体含量的方法能够对所含单体、二聚体和多聚体进行分离和定量，两种方法相辅相成，可以对生产的破伤风类毒素原液批间一致性进行监控和用于不同目的的破伤风类毒素质量情况进行监督。

    破伤风类毒素；电泳，聚丙烯酰胺凝胶；分子排阻色谱；单体；二聚体；多聚体

    www.cmbp.net.cn中国医药生物技术， 2016， 11(4)：333-339

    破伤风疫苗作为常规计划免疫品种已广泛应用到婴幼儿和适宜人群的预防接种，其生产工艺也一直沿用传统的技术：即培养细菌收获其毒素，毒素经甲醛脱毒、精制或精制后经甲醛脱毒制成类毒素，再和铝佐剂吸附制成成品。因此破伤风类毒素(tetanus toxoid，TT 或 TTd)的制备是此疫苗的基础。近年来，随着国内外细菌性结合疫苗的发展，破伤风类毒素作为载体蛋白质的应用也得到加强[1-3]。但有文献报道，破伤风类毒素的制备过程中，甲醛脱毒处理会导致蛋白结合物的产生，因为在毒素的解毒过程中，脱毒剂与毒素分子，蛋白胨和培养基中的其他蛋白分子反应[4]。这些反应的结果导致三种形式的交联，产生三种类型的产物，即①一个毒素分子内的交联，仍是单体，但是分子结构发生改变；②毒素分子之间的交联，形成二聚体或多聚体；③毒素分子与培养基中的肽或杂蛋白交联[5]。目前各厂家的生产工艺和脱毒工艺也存在一些差别：如脱毒和精制顺序不一致，脱毒方法和脱毒剂不一致，这些差别也加大了不同厂家之间的破伤风类毒素原液的质量差异。

    破伤风类毒素作为结合疫苗的载体蛋白应以分子质量相对较小的 TT 单体纯化蛋白为首选 ......