章毅，许惠利，王锋，王哲，李春丽，陈亮

    不同代次人胎盘间充质干细胞的生物活性比较研究

    章毅，许惠利，王锋，王哲，李春丽，陈亮

    目的 旨在观察不同代次人胎盘间充质干细胞(PMSCs)体外培养的生物学特性和体外诱导分化潜能，为间充质干细胞临床应用安全性及有效性提供实验依据。

    方法 无菌条件下获取人足月胎儿胎盘组织，通过 II 型胶原酶消化法分离 PMSCs，在常规培养条件下培养至第9 代，倒置相差显微镜观察 P0、P3、P6、P9 代次的间充质干细胞细胞形态；MTT 活细胞计数法检测细胞生长增殖能力；流式细胞术分析细胞周期及表面标志物的阳性表达率。同时进行成脂、成骨、成软骨诱导分化，诱导 14 d 后分别进行油红 O 染色、茜素红 S 染色、Masson 染色鉴定，观察并比较不同代次 PMSCs 的多向诱导分化能力。

    结果 PMSCs 具有很强的贴壁能力，主要呈纺锤梭形，不同代次的 PMSCs 有不同的体外增殖能力，以P0、P3 代较强；均高表达 CD73、CD90、CD105，低表达 CD14、CD34、CD45 和 CD20。细胞周期中 G0/G1 期细胞所占比例 P0为 90.95%、P3 为 88.97%、P6 为 85.93%、P9 为 67.89%，诱导分化实验显示，P6、P9 代细胞多向诱导分化能力逐渐降低。

    结论 提示在选择胎盘间充质干细胞作为种子细胞时，应注意选择适宜的扩增代数，以便既能保证足够的细胞数目又能保留细胞最佳的分化能力。

    胎盘； 间质干细胞； 细胞周期； 多向诱导分化

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2016, 11(5):400-406

    间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一群中胚层来源的具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，在适宜的培养条件下可被诱导分化成各种组织细胞，包括骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等[1]。最新研究表明，MSCs 易于外源基因导入表达[2]，而且具有调节免疫系统的功能[3]，因此不仅可作为组织工程的种子细胞，也为基因治疗提供了一个可靠的工具，同时在诱导移植耐受和治疗自身免疫性疾病中具有广泛的应用前景。目前报道的 MSCs 主要来源于骨髓，但骨髓中的含量很低，仅占骨髓中单个核细胞的 1/106～ 1/105[4]，且有时因病毒感染或因衰老使骨髓中细胞数量显著降低或骨髓增生分化功能降低，使骨髓来源的 MSCs受到了限制。故寻找一种能替代骨髓 MSCs，并可弥补其缺陷的 MSCs 来源已越来越受到重视[5] ......