刘蒙蒙，邢咏梅，郭顺星

    猪苓菌核自噬相关基因ATG8的克隆及表达分析

    刘蒙蒙，邢咏梅，郭顺星

    目的 克隆分离猪苓自噬相关基因 ATG8，并探讨其在猪苓防御蜜环菌入侵过程中的作用。

    方法 以猪苓菌核为材料，采用 RT-PCR 方法得到自噬相关基因的开放读码框全长，并利用荧光定量 PCR 检测该基因在不同猪苓菌核部位的表达量。

    结果 该基因开放读码框为 387 bp，编码 128 个氨基酸；该蛋白分子量为 14.838 kD，理论等电点为 5.85。氨基酸序列多重比对及系统发育树结果显示 PuATG8 与蚁巢伞属(termitomyces sp.)亲缘关系最近，与皱革菌(Punctularia strigosozonata)、密褐褶孔菌(Gloeophyllum trabeum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)有较高的同源性。PuATG8 为ATG 家族同源基因。荧光定量 PCR 结果表明，PuATG8 在未被蜜环菌侵染的猪苓菌核及被蜜环菌侵染的菌核中都有表达，其中被侵染部分的表达量显著上调。

    结论 PuATG8 可能参与了猪苓菌核的防御反应。

    猪苓； 自噬； 基因表达； 克隆

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2016, 11(5):415-419

    细胞自噬是广泛存在于真核生物细胞内的一种正常的分解代谢过程，是细胞在缺乏营养或胁迫条件下，通过降解细胞内衰老的蛋白质、受损伤的细胞结构和细胞器，为细胞的重建、再生和修复提供必需原料，实现细胞内物质的再利用，是生物体中一种重要的防御和保护机制[1-2]。自噬在生物的许多生理过程中扮演着重要的角色，比如生物体对外界胁迫的适应：如氧化应激胁迫[3]、盐[4]、干旱[5]和微生物侵染[6-7]等；参与生物体生长发育和分化过程中的细胞重建[8]。所以细胞自噬在真核细胞中是一个无处不在的正常的代谢过程[9]，作为一个细胞质量控制开关来消除衰老的细胞器和结构以维持内稳态[10-11]。但迄今为止，关于自噬过程的研究仍主要集中在酵母和哺乳动物中，在微生物中，尤其是大型真菌中的研究还特别少。

    自噬相关(ATG)蛋白参与许多细胞自噬过程的核心阶段[12]。目前，已经在酵母中发现了 31 种ATG 蛋白，其中 18 种蛋白(ATG1-10、ATG12-14、ATG16-18、ATG29、ATG31 等)已经被证明参与了自噬体的形成[13]。在自噬体形成的过程中，大部分自噬蛋白都以其独特的作用方式行使着不同的功能 ......