张雨，刘舒云，郭维民，郝春香，王明杰，苑志国，黄靖香，眭翔，张莉，卢世璧，郭全义

    人脐带间充质干细胞复合脱细胞软骨细胞外基质取向支架修复山羊膝关节全层软骨缺损的实验研究

    张雨，刘舒云，郭维民，郝春香，王明杰，苑志国，黄靖香，眭翔，张莉，卢世璧，郭全义

    目的 探索人脐带间充质干细胞复合脱细胞软骨细胞外基质取向支架构建组织工程软骨，用于修复山羊膝关节负重区全层软骨缺损的可行性。方法 从人脐带中分离、扩增培养人脐带间充质干细胞，并进行鉴定；以猪源脱细胞软骨细胞外基质取向支架为组织工程软骨支架载体；在成年山羊膝关节负重区股骨髁处造全层软骨模型；实验分为两组，以人脐带间充质干细胞复合脱细胞软骨细胞外基质取向支架修复组为实验组，单纯全层软骨缺损造模作为对照组，每组 3 只山羊。术后7 d、14 d 分别抽取关节液涂片行 H&E 染色，观察炎症反应。在术后 3、6 个月后分别处死两组实验动物，取材进行大体形态学观察及评分、组织学染色及评分、软骨特异性基质成分定量检测。结果 ①关节液涂片 H&E 染色结果显示，术后两组膝关节炎症反应未见明显差异。②大体形态学观察及组织学染色结果均证实，实验组修复区再生的关节软骨更加接近天然软骨，且与周边整合良好，获得更好的修复效果。大体形态学及组织学评分均证实，实验组的评分均要明显高于对照组(1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 材料来源 于本院产科经患者知情同意后获得足月产健康人脐带适量。取本实验室制备好的猪源脱细胞软骨细胞外基质取向软骨支架[7-8]，切为直径与厚度分别为 6.5 mm 和1.5 mm大小，并进行60Co 消毒备用。

    1.1.2 试剂 DMEM/F12 购自美国 Corning 公司；胰蛋白酶-EDTA 购自美国 Sigma 公司；CD45-PE 购自英国 Abcam 公司；速眠新 II 购自长春市军需大学兽医研究所；盐酸丁卡因购自武汉大华伟业医药化工有限公司；组织糖胺多糖比色法定量检测试剂盒购自上海杰美基因医药科技有限公司。

    1.1.3 实验动物 8 ~ 12 个月龄健康成年雄性普通山羊，体重 30 ~ 40 kg。大动物手术通过解放军总医院动物伦理委员会的论证。

    1.2 实验方法

    1.2.1 人脐带间充质干细胞的分离培养及鉴定获取足月产产妇新鲜脐带，经无菌处理及去除血液后，置于 DMEM/F12培养基培养皿中剔除动静脉血管。培养基再次清洗数次，剪为 1 mm3大小组织块，以适当的密度接种于直径 15 cm 的培养皿中 ......