窦玥莹，刘衡，张娜，刘璐，邓洪斌

    注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖与MPP+诱导的氧化损伤的影响

    窦玥莹，刘衡，张娜，刘璐，邓洪斌

    目的 探究注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞增殖与 1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的细胞氧化损伤的影响，为建立评价脑蛋白水解物活力检测方法提供科学依据。方法 通过 MPP+损伤 PC12 细胞后，采用 MTT 法测定不同厂家、不同浓度的注射用脑蛋白水解物对 PC12 细胞的修复作用，通过测定其吸光度与正常细胞吸光度的比值来计算样品对 PC12 细胞损伤的修复率，以此作为注射用脑蛋白水解物活力考察的指标。同时还对注射用脑蛋白水解物对于 MPP+损伤的不同亚型的PC12 细胞作用进行了研究。结果 注射用脑蛋白水解物作用时间为 48 h、浓度为60 μg/ml 时对 MPP+诱导的PC12 细胞的氧化损伤具有较好保护作用，并且对低分化型的 PC12 细胞具有更明显的保护作用。结论 注射用脑蛋白水解物可促进低分化型 PC12 细胞的增殖，并减轻 MPP+的损伤作用。研究建立的活力测定方法已经被国家标准采纳。

    PC12 细胞； MPP+； MTT； 注射用脑蛋白水解物

    脑蛋白水解物是从健康的猪脑中提取得到的一种活性肽类水解物，含有多种氨基酸、卵磷脂及脑磷脂等，对于神经系统具有重要的保护作用。脑蛋白水解物能够显著提高使用者的记忆力及注意力，因而临床上常用于阿尔茨海默症(老年痴呆)等神经系统疾病的治疗。目前国内生产注射用脑蛋白水解物的厂家较多，因此需要建立合适的活性检测指标对其进行质量考察[1]。PC12 细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化的细胞株，其受体及合成的递质均与中脑多巴胺能神经元十分接近，具有典型的神经细胞特征，因此广泛应用于神经细胞死亡方式和神经毒性损害的研究。目前，在具有神经保护作用的药物筛选中，PC12 细胞模型已得到广泛应用[2]。

    目前文献报道较多的 PC12 细胞损伤模型有 H2O2损伤模型和 1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)损伤模型。H2O2化学性质不稳定，遇光、热以及长期存放都容易降解。我们前期的研究中也发现，用 H2O2损伤模型评价注射用脑蛋白水解物活力的结果重现性较差，因此本研究中我们采用 MPP+损伤模型。MPP+为 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)经神经胶质细胞内的单胺氧化酶 B 催化后产生的有毒阳离子，它可杀死大脑中黑质致密部产生多巴胺的神经细胞[3]。MPP+在引发产生多巴胺神经细胞死亡上具有高度选择性 ......