高金苹，张绍菊，罗志红，李津

    长链非编码RNA CCAT1对人宫颈癌XB1702细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

    高金苹，张绍菊，罗志红，李津

    目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子 1(CCAT1)对宫颈癌 XB1702 细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。

    方法通过电穿孔法分别将 CCAT1 siRNA 和重组表达载体 pcDNA3.1-CCAT1 转染人宫颈癌 XB1702 细胞后，G418 筛选得到稳定转染细胞系，实验分为 3 组：CCAT1 siRNA 转染组、pcDNA3.1-CCAT1 转染组和空白对照组。转染 48 h 后，RT-PCR 检测细胞中 CCAT1 lncRNA 表达水平；CCK8 检测细胞增殖，TUNEL 法检测细胞凋亡影响；裸鼠移植瘤实验检测上调和下调 RNA CCAT1 表达联合 X射线照射对宫颈癌的生长抑制作用。

    结果干扰 XB1702 细胞中 CCAT1 lncRNA 表达后，XB1702 细胞增殖被抑制，细胞凋亡率增加；裸鼠移植瘤平均体积明显小于对照组(正常 XB1702 细胞种植组)差异有统计学意义(P 1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 6 周龄健康 BALB/c 裸鼠36只，体重 100 ～ 120 g，均为雄性，由河北医科大学动物实验中心提供。室温 25 ℃，湿度 50% ～80%，SPF 环境下自由饮水和采食。

    1.1.2 仪器和试剂 DMEM 完全培养基中包含2 mmol/L L-谷氨酞胺、10% FBS、1 mmol/L 丙酮酸钠、100 mg/ml 青霉素链霉素二抗；BCA 蛋白浓度测试试剂盒(增强型)、5 × SDS 蛋白上样缓冲液、20 × TBS 缓冲液等购自南京建成生物工程研究所；胰蛋白酶购自美国 Sigma 公司；PBS 磷酸缓冲液购自美国 Hyclone 公司；细胞培养箱购自德国HeraesSepatech 公司；Trizol 试剂盒购自美国Invitrogen 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 实验模型的建立及分组 将冻存的宫颈癌XB1702 细胞置于 60 ℃ 恒温水浴箱，30 s 内进行细胞的快速复苏。细胞液融化后迅疾转入 EP 管并加入 DMEM 培养基，重复小心吹打细胞使其均匀分布，随后离心弃上清液。将复苏后的细胞用LG-DMEM 完全培养基调整为 1 × 106个/ml 的密度进行培养。

    将培养 24 h 的细胞取出，分为 3 组 ......