章佳英，嵇承栋，万悦竹，付强强，朱琳懿

    生物样本库中血液RNA提取方法的介绍

    章佳英，嵇承栋，万悦竹，付强强，朱琳懿

    RNA 在人类的多种生理和病理过程中发挥着举足轻重的作用[1-2]。随着第二代测序技术的发展[3]，针对人类不同疾病的 RNA 样本测序研究广泛开展，并得到了大量有价值的发现。高质量的 RNA 可以满足 RT-PCR、qRT-PCR、Northern blot、基因表达谱、转录组测序、核酸酶保护实验和阵列分析等生物学下游实验的研究需求[4-5]。

    在脊椎动物中，外周血一直被认为是侵害性较小、较有价值的 RNA 来源[6-7]。在许多生物样本库中，由于血液样本的常规收集、处理及保存方法简便、成本低且富含可利用成分(如血清、血浆、白细胞和红细胞等)和生物分子(DNA、RNA、蛋白质和代谢产物)，因此是进行多个项目分析的理想实验材料。然而，RNA 极易降解，许多因素如内源性和外源性的 RNA 酶、预处理、保存和提取过程，可能会不同程度地影响 RNA 实验结果。因此，必须注意样本收集、处理和储存过程中的各个环节，从根本上确保获得高质量的RNA[8]。

    以前的研究比较了不同采样技术或提取方法对 RNA的影响[9-10]，但是尚无关于血液样本 RNA 抽提的系统报道。因此，本文评估各种不同采样技术结合提取方法，比较不同方法对血液 RNA 产量和质量的影响。本研究目的是找到最合适的血液 RNA 提取方案，以便在生物样本库中作批量应用。

    1 RNA 提取方法

    常见的 RNA 提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、热硼酸法或改良热硼酸法、LiCl-尿素法、改良的 Gomez 法、异硫氰酸胍法、TRIzol 试剂快速提取法、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法。

    随着生物技术的不断发展，很多生物技术公司着手RNA 提取试剂盒的研究并取得丰硕成果，将科研人员从繁琐的提取、纯化工作中解放出来。目前，RNA 提取中常用的试剂盒主要分为 3 种：TRIzol 试剂一步法、TRIzol LS 试剂一步法和 PAXgene 试剂盒法，前两者均使用苯酚和异硫氰酸胍的单相溶液，而 PAXgene 法需根据试剂生产商说明书操作。

    近年来，RNA 提取方法有了很大改进[11]，本文选取12 种具有代表性的提取方法进行系统比较(表 1)，其中Liu 等[12]系统地比较了其中 6 种方法(A ～ F)，提取过程见图 1；而 H?ntzsch 等[13]比较了另外 6 种方法(G ～ L)(图 2) ......