富岩，杨小楠，魏开华，富俞淞，云文琦，郑博崴，刘丹，于在林

    具创新分子结构的更优长效性重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白的表达、制备和特性研究

    富岩，杨小楠，魏开华，富俞淞，云文琦，郑博崴，刘丹，于在林

    目的研究作为药物级别重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白的生产制备工艺；开展详尽的融合蛋白理化特性研究；提出作为长效创新药物的质量基础和技术指标。

    方法利用基因工程技术构建 1 个能稳定表达全新分子结构和更优长效性的重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白(rHSA/EPO)的基因工程 CHO 细胞株；研究建立悬浮、无血清培养基，批次化、可线性放大的规模化生产工艺，并就分离纯化的融合蛋白进行详尽的理化特性分析。

    结果获得的 rHSA/EPO 蛋白质单体纯度达到 97% 以上；经不同作用位点蛋白酶水解的 rHSA/EPO 产物通过MALDI-TOF/TOF 质谱肽质量指纹谱和 Nano LC-MS/MS液质联用串联质谱检测得到总序列覆盖率 100%；N-端氨基酸序列前 15 个氨基酸与理论序列相符；rHSA/EPO 为糖基化蛋白，定位了糖基化位点；原液中融合蛋白的质谱分子量测定值为 93 kD；酶深度脱糖后的质谱分子量测定结果为84205 D，与理论分子量 84849.52 D 值相近；融合蛋白含有 1 个自由巯基，表明仅有 1 个游离半胱氨酸存在；经圆二色光谱分析比对表明,HSA 和 EPO 各自的空间二级构象未变；毛细管电泳测定有多个电荷异构体范围在 pI 5.1 ～5.8，等电聚焦获得的等电点值(pI)约为 pI 4.9；紫外光谱呈现典型蛋白质光谱特征；原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源性 DNA 的残留量均符合药物原料药的要求。免疫学鉴别为阳性；小鼠体内生物比活性测定结果值为 0.9 × 105IU/mg；体外 UT7 细胞法与小鼠体内生物活性测定较大差异，但体内与体外生物活性测定方法可用于不同试验目的，且相互间也具有一定的相关系数。

    结论理化特性研究获得较为全面的药学数据，其结果可作为指导“注射用重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白(CHO细胞)”原料药的质量标准和制造检定规程的基础，并显示出原创的 rHSA/EPO(之间无连接肽)具有创新性，符合作为药物的更优分子结构要求。

    白蛋白类； 红细胞生成素； CHO 细胞；重组融合蛋白质类

    慢性肾病患者(肾衰、尿毒症尤其是进行透析的晚期患者)因其肾脏无法生成足量红细胞生成素，常常会罹患贫血症；接受化疗的癌症患者亦可能罹患贫血症而迫使他们终止化疗 ......