韩婷，魏维，戈梅，钱秀萍

    调控基因对万古霉素生物合成的影响

    韩婷，魏维，戈梅，钱秀萍

    目的通过对东方拟无枝酸菌的调控基因进行研究及改造以获得高产万古霉素的突变株。

    万古霉素； 调节元件，转录； 东方拟无枝酸菌

    20 世纪 80 年代，由于 β-内酰胺类抗生素的大量使用，耐甲氧西林金葡菌(MRSA)逐渐流行，目前，万古霉素是临床上用于由 MRSA 引起的严重感染性疾病的一线药物，受到人们的重视[1]。东方拟无枝酸菌(Amycolatopsisorientalis)是万古霉素的产生菌，属革兰阳性放线菌，假诺卡菌亚目，假诺卡菌科，拟无枝菌酸菌属[2]，历史上曾将其归为链霉菌属，诺卡菌属。近年来国内许多学者通过对万古霉素产生菌的反复自然分离、物理化学方法诱变和发酵条件优化等途径提高其产量[3-5]。

    随着生物化学、分子生物学等的发展，万古霉素产生菌的分子信息越来越清晰，2014年，Xu等[6]对一株万古霉素高产菌东方拟无枝酸菌HCCB10007 进行了全基因组测序，就其基因序列与已报道的基因序列比对与分析，推测到有 10%的基因编码调控蛋白，本研究从中选取了AORI_1475、AORI_1832、AORI_2956、AORI_3531、AORI_3398、AORI_7412 六个基因进行过表达实验，考察这六个调控基因对万古霉素合成的作用。AORI_1475 推测为 strR 型转录调控基因，可能与Amycolatopsisbalhimycina 中的 bbr(strR 型转录调控基因)一样起正调控作用[7]。AORI_1832、AORI_2956 和 AORI_3531 推测为 araC 型转录调控基因，可能也具有正调控作用，因为有文献报道 araC 型的 rapG 正调控雷帕霉素(产生菌为链霉菌属)的合成[8]。AORI_3398、AORI_7412 推测为 lysR 型调控基因，lysR 被认为是全局转录调控基因，一般作为激活子或阻遏子起作用。微生物的次级代谢途径受许多调控基因影响，通过对HCCB10007 中数个调控基因的研究，确定其对万古霉素合成的影响，为提高万古霉素产量，减少副产物的发酵工艺完善提供重要的线索。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 菌株和质 粒 东方拟无枝酸菌HCCB10007、E.coli JM110 由上海来益生物药物研发中心保藏，E.coli DH5α 购自天根生化科技(北京)有限公司；质粒 pLYW2(pSET152含有 ermEp*启动子)由上海来益生物药物研发中心提供 ......