凌耿强，马东营，何瑞星，王悦娜，叶伟

    肿瘤细胞微环境对胶质瘤血管生成拟态形成的影响

    凌耿强，马东营，何瑞星，王悦娜，叶伟

    目的探讨肿瘤细胞微环境改变对胶质瘤血管生成拟态(VM)形成的影响。

    胶质瘤； 血管生成拟态； 肿瘤细胞微环境； 缺氧； 抗血管生成治疗

    脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤之一，其血供丰富，应用抗血管生成治疗对控制胶质瘤生长效果明显[1]。但是，近年发现胶质瘤对抗血管生成药物具有抗药性，其机制可能与血管生成拟态(vasculogenic mimicry，VM)相关[2]。VM 是一种不依赖于内皮细胞而形成的供血管道，已经被发现存在于多种恶性肿瘤中[3]，并且有研究提示 VM 与胶质瘤患者的预后相关[4]。因此，VM 可能是胶质瘤治疗的新靶点之一[5]。

    既往认为，VM 形成与否跟肿瘤细胞自身特性有关，不形成 VM 的肿瘤细胞对周围基质环境进行重塑的能力很弱，即使添加了一些与形成管道相关的细胞因子，包括血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等，也无法产生管道样结构[2]。最近有研究显示，原本无法形成 VM 的低度恶性肿瘤细胞在某些环境中(如大于 2% 的缺氧环境)也可以形成 VM 结构[6-7]。因此我们推测肿瘤细胞所处的微环境才是其能否形成 VM 的决定因素。微环境的改变与细胞外基质中 VM 相关的细胞因子(VEGF、bFGF、TGF-β、PDGF、TNF-α)浓度变化以及基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)活性水平相关。在本课题中，我们拟采用多种改变微环境的方法诱导低恶性度胶质瘤细胞 SHG44 形成VM 结构，并通过检测微环境中多种细胞因子的浓度变化和基质金属蛋白酶的活性水平探讨其可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    人脑胶质瘤细胞系 U251 购自上海博士德生物工程有限公司；人脑胶质瘤细胞系 SHG44 购自赛百慷(上海)生物技术股份有限公司；10% 胎牛血清、胰蛋白酶购自美国 Hyclone 公司；高糖DMEM 培养基购自美国 Gibco 公司；Matrigel 购自美国 Becton Dickson 公司；CoCl2购自美国Sigma 公司；VEGF、TGF-β、bFGF、PDGF、TNF-α酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自上海史瑞可生物科技有限公司 ......