章毅，陈亮，李萍，许惠利，王哲，伍婷，张澄宇

    人胎盘间充质干细胞微环境对心肌细胞增殖的影响

    章毅，陈亮，李萍，许惠利，王哲，伍婷，张澄宇

    目的观察胎盘间充质干细胞微环境对心肌细胞增殖的影响。

    肌细胞，心脏； 细胞微环境； 胎盘间充质干细胞

    随着人类对间充质干细胞的生物学特性及研究进一步加深，已从骨髓、外周血、脂肪等组织中成功分离鉴定出间充质干细胞。胎盘作为胚胎发育期间维系母体和胎儿营养物质交换和氧气运输的重要临时性器官，富含大量的间充质干细胞，其在胎儿娩出时即完成最后使命，成为“医疗废弃物”，对其研究和临床应用不涉及任何伦理道德问题，目前已经成为寻找人间充质干细胞的新来源，并成为临床应用效果研究的新热点。利用人胎盘间充质干细胞(placenta derived mesenchymal stem cell，pMSC)增殖分化这一潜能，进行心肌细胞再生修复，心肌细胞损伤修复并进一步修复心脏功能，也已成为心脏病等心血管疾病治疗的一种新医疗手段。人胎盘间充质干细胞为再生受损组织器官提供了巨大的希望，但受其有效性、尚不清楚的机制、缺血环境中移植细胞的生存问题等诸多因素的阻碍。因此，开发无细胞组分如人胎盘间充质干细胞微环境制剂部分替代干细胞治疗显得尤为重要。本文从胎盘组织绒毛膜中分离鉴定获得间充质干细胞，采用人胎盘间充质干细胞培养基上清模拟胎盘间充质干细胞微环境，观察人胎盘间充质干细胞微环境对心肌细胞的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    胎盘采集于足月健康新生儿，符合国家相关法律和伦理委员会规定，经产妇或家属签署知情同意书后获得。成脂、成软骨、成骨诱导套装购自美国Gibco 公司；CCK8 试剂盒购自碧云天公司；PI、RNase A 购自美国 Sigma 公司；MSC Phenotyping kit(CD105-PE、CD90-FITC、CD73-APC、CD14-/CD19-/CD34-/CD45-PerCP) 购 自 德 国Miltenyi Biotec 公司；油红 O 染液、Masson 染液、茜素红 S 染液购自南京建成公司；H9C2 细胞购自中科院细胞库；transwell 小室购自美国Thermofisher 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 pMSC 的分离培养 无菌条件下剪取胎盘绒毛膜组织，剪成约 5 mm3的碎块，加入 II 型胶原酶恒温消化 1.5 h，室温 2000 r/min 离心 10 min，加入含 10% FBS 的培养液重悬细胞 ......