张永欣，赵斐，王宇佳，张瑞欣，岑山

    新型siRNA抗流感病毒活性的研究

    张永欣*，赵斐*，王宇佳，张瑞欣，岑山

    目的设计合成具有广谱性抗流感病毒活性的 siRNA，分别在细胞内和小鼠体内进行活性评价。

    方法从甲型流感病毒毒株 A/WSN/33 的基因(PB2、PB1、PA、M、NS)中提取高度保守的序列设计合成 siRNA。通过 293T-Gluc 系统和单轮感染流感病毒系统对 siRNA 进行活性筛选。然后在细胞水平检测 siRNA 对流感病毒复制的抑制作用，并且经雾化给药途径对 siRNA 的体内抗流感活性进行评价。

    结果活性筛选得到 4 条具有 50% 以上抑制活性的siRNA(siPB2-1、siPB2-2、siPB1-2 和 siNS-1)，EC50值在0.4 ～ 1.3 nmol/L 之间。4 条 siRNA 对另外两株 A/PR/8/34和 B/Beijinghaidian/1386/2013(Victoria 系)流感病毒均表现出较好的抑制活性。动物实验表明，siPB2-1 经雾化给药途径可以对流感病毒感染的小鼠产生一定的保护作用。

    结论新合成的 siRNA 在细胞水平和小鼠体内均具有良好的抗流感病毒活性。

    流感病毒，A 型； RNA，小分子干扰； 动物实验

    流感病毒是引起人类急性呼吸道传染病最主要的病原，主要通过空气飞沫传播，具有传播速度快、发病率高和常伴有严重并发症等特点。流感每年在温带的秋冬季节大量流行，造成相当高的发病率和死亡率，严重威胁人类健康。据估计，全世界每年会有 25 万 ～ 50 万人因此丧生[1]。流感病毒可以在不同宿主之间直接或间接传播，易发生基因重配产生新的亚型，从而带来灾难性的后果。如人类历史上的几次流感大爆发，已导致全球数百万人丧生。而 2013 年在我国出现的 H7N9 禽流感病毒更是以相当高的死亡率再次引起人们对流感病毒的高度关注。

    流感病毒属于正黏病毒科，分为甲、乙、丙三型。其中甲型流感病毒危害最大，至今为止的流感大流行都是由甲型流感病毒引发。甲型流感病毒的基因组由 8 条单股负链 RNA 组成，在病毒自身编码的 RNA 聚合酶和宿主因子的共同作用下转录形成互补的正链 mRNA，共编码 10 种病毒蛋白。其中 PB2、PB1 和 PA 三个蛋白组成流感病毒的 RNA 聚合酶(RdRP)，负责催化病毒基因组的转录和复制[2]。M 基因编码 M1 和 M2 两种蛋白，流感病毒进入细胞后，H+经由 M2 离子通道进入病毒颗粒内部 ......