李霓，王潇，许艳妮，韩小婉，刘鹏，司书毅

    重组蛋白AdipoR1-EGFP真核表达质粒的构建和表达

    李霓，王潇，许艳妮，韩小婉，刘鹏，司书毅

    目的构建重组 pEGFP-N1-AdipoR1 真核表达质粒并于HEK293T 细胞中瞬时表达。

    方法提取 HepG2 细胞总 RNA，逆转录合成 cDNA，以其为模板，PCR 扩增 AdipoR1 基因，将其插入到 pEGFP-N1质粒中，构建重组真核表达质粒 pEGFP-N1-AdipoR1，通过脂质体法转染 HEK293T 细胞，采用酶标仪测定荧光强度，Western blot 方法鉴定融合蛋白 AdipoR1-EGFP 的表达情况。

    结果Western blot 结果显示，融合蛋白 AdipoR1-EGFP在分子量约 70 kD 处可见明显的目的条带；同时，与未转染质粒的空白对照组相比，转染 pEGFP-N1 和pEGFP-N1-AdipoR1 的细胞中荧光强度都有明显升高，表明融合蛋白 AdipoR1-EGFP 在 HEK293T 细胞中成功表达，并且 EGFP 的荧光强度测定能很好地反映细胞中融合蛋白的表达水平。

    结论构建并表达 AdipoR1-EGFP 融合蛋白，所采用的EGFP 融合蛋白表达方法简单高效，重复性好，为今后AdipoR1 蛋白的表达及功能研究提供了重要参考。

    受体，脂联素； 绿色荧光蛋白质类； 膜融合蛋白质类

    脂联素是一种由脂肪组织分泌的脂肪因子，具有抗动脉粥样硬化以及降低血糖等作用[1-3]。已有研究表明，在肥胖、胰岛素抵抗和 2 型糖尿病等人群中，血浆中脂联素水平呈显著降低[4]。脂联素受体(adiponectin receptors，AdipoR)是机体内脂联素的主要受体，包括 AdipoRl 和 AdipoR2 两个亚型，是含有 7 个跨膜结构域的受体蛋白。Yamauchi等[5]于 2003 年首次克隆出人和小鼠的脂联素受体基因，为今后研究其结构和功能提供了重要基础。随后的研究发现，AdipoRl 的表达涉及激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)通路，而 AdipoR2 的表达与过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor，PPAR)信号通路的激活相关，从而它们参与葡萄糖代谢、脂质代谢、炎症反应及氧化应激反应等生理过程的调控。

    随着研究内容不断丰富，有研究人员发现，AdipoR1 主要在骨骼肌细胞中表达 ......