纪巧，周显礼，凌耿强，王晓蕾，韦虹，杜琳瑶

    超声微泡造影剂携带PE38生物毒素杀伤血管内皮细胞的实验研究

    纪巧，周显礼，凌耿强，王晓蕾，韦虹，杜琳瑶

    目的研究超声微泡造影剂 PLGA-COOH 联合生物毒素PE38 对内皮细胞的杀伤效应。

    方法制备超声微泡造影剂 PLGA-COOH，包裹生物毒素PE38 后形成复合物，将血管内皮细胞分为空白对照组、辐照微泡组、PE38 组、复合物组、辐照复合物组，以 TUNEL实验检测凋亡指数，以 Western blot 实验检测 cleaved caspase-3，并进行组间比较。

    结果TUNEL 结果显示：辐照微泡组细胞凋亡与空白对照组无显著差异(P = 0.946)；PE38 组细胞凋亡较空白对照组显著增加(P < 0.001)；复合物组细胞凋亡较 PE38 组显著下降(P < 0.001)，较空白对照组显著增加(P < 0.001)；辐照复合物组细胞凋亡较 PE38 组显著增加(P < 0.001)。蛋白检测结果与凋亡检测相符。

    结论超声造影剂微泡复合物联合生物毒素杀伤血管内皮细胞具有较高的安全性、特异性及有效性，是一种具有前景的肿瘤血管杀伤方法。

    超声微泡造影剂； 生物毒素； 内皮细胞

    抗血管生成疗法在多种肿瘤的治疗中起着重要的作用，其主要机制之一是抑制肿瘤血供从而“饿死”肿瘤细胞[1]。抑制肿瘤血供主要有两种方式，即阻止内皮细胞构成血管和杀伤肿瘤血管结构。内皮细胞构成血管的信号通路极其复杂，阻断单一通路难以达到彻底抑制肿瘤血供的效果[2]。而杀伤肿瘤血管结构是一种直接有效的方法，目前已有研究证实应用重组免疫毒素能够抑制肿瘤血供[3]。由于重组免疫毒素造价高昂，短时间内大规模应用于治疗对患者负担巨大，因此需要探索一种造价相对低廉的特异性切断肿瘤血供的方法。

    超声微泡造影剂是一种造价低廉、可大规模生产的药剂，且其具有包裹携带药物的功能。通过超声辐照，微泡造影剂可以在特定的组织器官内破裂，释放出携带的药物，使药物在局部的浓度明显增高，达到更好的治疗目的[4]。目前对于超声微泡携带生物毒素杀伤肿瘤血管的研究很少。因此，在本研究中我们首次尝试应用超声微泡造影剂包裹非特异性生物毒素形成复合物，并观察其安全性，以及在超声辐照前后其杀伤血管内皮细胞的效果。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)购自中科院上海细胞库；一抗兔抗人 cleaved caspase-3抗体为上海碧云天生物技术有限公司产品；兔抗人GAPDH 抗体为 LSBio 公司产品；TUNEL 试剂盒为美国 Roche 公司产品 ......