魏东，谢安平，陈成，王国治

    金黄色葡萄球菌噬菌体效价测定方法的建立

    魏东，谢安平，陈成，王国治

    金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起人类及动物化脓性感染的常见致病细菌，是引起烧伤患者创面感染的主要病原体。对于金黄色葡萄球菌感染的治疗药物，人们一直在努力探索。自从 1928 年 Fleming 发现青霉素，20 世纪 40 年代用于治疗金黄色葡萄球菌后不久，即出现耐青霉素的金黄色葡萄球菌。20 世纪 50 年代，Beecham发现了耐青霉素酶的 β-内酰胺类药物甲氧西林，但仅仅几年后，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(methicillin-resistan Staphylococcus aureus，MRSA)就相继在欧洲和美国出现[1]。20 世纪 80 年代以后，MRSA 感染呈现上升趋势，甚至引起医院的暴发流行[2-3]。万古霉素曾被誉为抗感染治疗领域的“最后一道防线”，但从 1996 年至今，全球范围内已报道多例对万古霉素耐药的病例，引起医学界的高度重视[4-5]。目前，需要一种不同于抗生素的新型金黄色葡萄球菌感染治疗方法。

    与传统治疗方法相比，噬菌体治疗可避免抗生素的副作用及过敏反应[6-7]。随着 MRSA 等耐药菌在医院和社区的流行传播，噬菌体的药用价值再次受到人们的重视，将噬菌体的临床研究带入了一个新的阶段[8]。对于金黄色葡萄球菌的噬菌体类治疗用生物制品，其效价直接影响着制品的有效性。为此，本研究建立了金黄色葡萄球菌噬菌体效价的测定方法，为噬菌体制剂的质量控制奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 噬菌体及菌种 金黄色葡萄球菌(编号：CMCC(B) 26554)、金黄色葡萄球菌噬菌体(编号：CMCC(B)26554-P1)为中国食品药品检定研究院保存。

    1.1.2 主要试剂 营养琼脂培养基、脑心琼脂培养基由中国食品药品检定研究院培养基室提供；标准细菌比浊管由中国食品药品检定研究院提供；氯化钠(NaCl)、氯化钙(CaCl2)、三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)、明胶购于国药集团化学试剂有限公司；硫酸镁(MgSO4·7H2O)购于上海美兴化工有限公司。

    1.1.3 实验仪器 DH6000AB 培养箱购自天津市泰斯特仪器有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 单层琼脂培养法与双层琼脂培养法的比较 单层琼脂培养法，取 100 μl 金黄色葡萄球菌菌液与 100 μl 适当稀释度的噬菌体混合 ......