乔龙娟，王林，黄加秀，田颖，王君

    盐酸左氧氟沙星注射液灭菌前已灌封样品微生物限度检查方法学的建立

    乔龙娟，王林，黄加秀，田颖，王君

    盐酸左氧氟沙星为氧氟沙星的左旋体，其抗菌活性约为氧氟沙星的两倍，主要作用机制为抑制细菌 DNA 旋转酶的活性，阻碍细菌 DNA 复制，对大多数革兰阴性菌和革兰阳性菌均有较强的抗菌作用[1]。因其抗菌谱广，抗菌作用强，维持时间长，疗效高，不良反应轻微，临床应用范围广泛[2]。

    根据新版 GMP 的要求，应当依据所用灭菌方法的效果确定灭菌前产品微生物污染水平的监控标准，并定期监控[3-4]。检验方法的可靠直接决定产品日常监测的结果，笔者据此建立了盐酸左氧氟沙星注射液灭菌前已灌封样品的微生物限度检查方法，并进行了方法学验证。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 供试品 盐酸左氧氟沙星注射液配制液(规格：0.1 g/ml，批号：16062231、16071131、16071331)为扬子江药业集团有限公司产品。

    1.1.2 试验用菌种 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉菌[CMCC(F)98003]均来自中国菌种保藏中心。

    1.1.3 稀释液和缓冲液 0.9% 无菌氯化钠溶液、pH 7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液均为自制。

    1.1.4 培养基 胰酪大豆胨液体培养基(批号：20160310)、胰酪大豆胨琼脂培养基(批号：20160308)、沙氏葡萄糖琼脂培养基(批号：20160310)、沙氏葡萄糖液体培养基(批号：20160318)，均由北京三药科技开发有限公司提供。

    1.1.5 仪器 ZH-2 型旋涡混合仪购自上海沪西医疗仪器厂；HTY-601 型集菌仪和全封闭集菌培养器均购自浙江泰林生物技术股份有限公司；KB400 型恒温培养箱购自德国宾得公司。

    1.2 方法

    1.2.1 菌液制备 分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30 ～35 ℃ 培养 18 ～ 24 h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20 ～ 25 ℃ 培养 24 ～ 48 h。上述培养物用 0.9% 无菌氯化钠溶液稀释成含菌数小于 100 cfu/ml的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂斜面培养基中 ......