谭亚军，王丽婵，卫辰，张华捷，侯启明，张庶民，马霄

    肺炎链球菌蛋白PspC的制备与鉴定

    谭亚军，王丽婵，卫辰，张华捷，侯启明，张庶民，马霄

    100050 北京，中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

    对肺炎链球菌表面蛋白 C(PspC)进行全基因合成、重组表达、纯化制备和鉴定。根据 GenBank 中 PspC 的基因序列和氨基酸序列，通过密码子优化和全基因合成的方式获得目的蛋白基因，构建无标签、高效重组表达菌株，建立重组蛋白的纯化制备方法，并进行抗原鉴定及免疫原性检测分析。人工合成的 PspC 基因序列经鉴定与预期一致，目的蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达，表达量在 30% 以上，经两步纯化后纯度达到 95%。重组蛋白能与肺炎链球菌阳性血清产生特异性抗原抗体反应，免疫小鼠后可诱导产生较高水平的蛋白特异性抗体。获得了重组肺炎链球菌蛋白 PspC，其具有与天然抗原相似的抗原性和免疫原性，为今后开展疫苗研制、载体蛋白应用等研究奠定基础。

    肺炎链球菌； 重组蛋白质类； 肺炎链球菌表面蛋白 C

    肺炎链球菌表面蛋白 C(pneumococcal surface protein C，PspC)，也称为胆碱结合蛋白 A(choline binding protein A，CbpA)，是一个多型蛋白，分子量在 69 ~ 120 kD 之间，具有与肺炎链球菌表面蛋白 A(pneumococcal surface protein A，PspA)高度同源的胆碱结合结构域。主要由信号肽(37 个氨基酸)，α 螺旋区，脯氨酸富集区，胆碱结合区和C 端尾巴五个区域组成，其 N 端的 α 螺旋区在不同的肺炎链球菌株中大小和序列都高度可变。根据结构不同，PspC 可分为 Clade A 和 Clade B 两种类型，其中 Clade A 序列较长，α 螺旋区与 PspA 一样包含 region1 和 region 2 两个区域，Clade B 则只包含 region 1 区域，分离菌株中 Clade B 所占比例可高达 96%[1]，两者与 PspA 都具有交叉反应。PspC 既是黏附素，又是侵袭蛋白，还可以与补体 C3、人血清因子 H 结合，帮助细菌免于补体旁路途径的攻击。由此可见，PspC 是一个多功能蛋白，在肺炎链球菌黏附、入侵和逃避机体补体系统进攻过程中起主要作用[2]。N 端 α 螺旋区域虽然可变度大，但形成的空间构象种类有限，并具有免疫保护作用，试验结果显示 PspC 的 N 端区能够大大提高腹腔或者静脉攻击动物的存活率[3-11] ......