吴峰，刘建彬，胡泽斌

    采用细胞质特异性定位的荧光探针观察细胞多核化现象

    吴峰，刘建彬，胡泽斌

    100142 北京，空军航空医学研究所(吴峰)；100142 北京，空军总医院临床检验中心(刘建彬)；100050 北京，中国食品药品检定研究院体外诊断试剂检定所(胡泽斌)

    细胞多核化是指一个细胞的细胞质中同时存在两个或多个细胞核[1-5]。细胞多核化现象的产生通常是由于处于基因组复制中的细胞，其染色体运动发生异常，形成了不同大小的细胞核。这些大小不一的细胞核均被核膜包裹，对于比较小的细胞核，通常称为微核或核片段。细胞多核化现象既存在于病理状态的细胞，也可以存在于生理状态的细胞中。研究发现：细胞多核化现象与多种疾病相关。病理检验中发现多核化的巨型细胞的存在与慢性炎症有关[6-7]。另外，细胞多核化提示细胞染色体的不稳定，所以细胞多核化现象也频繁出现在肿瘤细胞中[8-9]。

    目前细胞多核化现象的评估主要是采用细胞核染色的方法[1-2, 5]。对于固定好的细胞，细胞核染料，如吉姆萨、苏木精，可以将细胞核染色，细胞质基本没有着色，从而可以观察到细胞质中是否存在多个细胞核的现象。但是，这种方法观察到的细胞边缘往往模糊不清，难以判断几个细胞核是位于同一个细胞还是相邻细胞中。对于活细胞中多核化现象的观察，则通常采用细胞核荧光染料，如 DAPI、Hoechst，将活细胞细胞核染色。通过细胞核荧光染色的图片与明场中的细胞图像进行叠加，可以确定多个细胞核是否位于一个细胞内。缺点同样是明场中细胞的边界不是很清楚，边缘难以判断[9]。

    细胞质特异性定位的荧光探针(cytoplasm localized fluorescent probe，CLFP)是指一类能够特异性聚积在活细胞细胞质中的荧光染料[1, 10-15]。将活细胞与 CLFP 探针进行孵育，在荧光显微镜下能够清晰地观察到细胞质的荧光形态以及细胞质的边缘形态。近年来，CLFP 探针已经被逐步地应用于各种细胞成像研究中。本研究中，我们根据文献设计合成新的 CLFP 探针，并且建立了通过荧光影像方法区分细胞多核化现象。

    1 材料与方法

    1.1 主要仪器和试剂

    色谱用层析硅胶为青岛海洋化工厂产品，其余化学试剂和溶剂购自北京偶合科技有限公司和北京伊诺凯科技有限公司，均为市售分析纯产品。核磁共振仪为 Bruker AVANCEIII 400，中压纯化色谱仪为 Biotage Isolera One，高分辨质谱仪为 Thermo Exactive Orbitrap plus ......