郭雷鸣，丁高峰，徐文才，陈淅涓，蒋月，陆寓非

    人S100A8和S100A9原核载体的构建、鉴定及蛋白纯化

    郭雷鸣，丁高峰，徐文才，陈淅涓，蒋月，陆寓非

    目的分别构建人 S100A8(hS100A8)和 S100A9(hS100A9)的 PET-28a 原核表达载体，并纯化 hS100A8和 hS100A9 蛋白，为进一步研究 hS100A8 和 hS100A9蛋白的分子生物学功能奠定实验基础。

    方法用带酶切位点的引物从 hS100A8 和 hS100A9 的真核表达载体扩增 hS100A8 和 hS100A9 基因片段，用相同的限制性内切酶双酶切 PCR 产物和 pET-28a 质粒。将两者用 T4 连接酶连接后转化入感受态细胞 DH5α，提取质粒进行鉴定。将构建成功的 pET28a-hS100A8 和pET28a-hS100A9 分别转化感受态细胞 BL21，诱导蛋白表达，将等量纯化蛋白在一定钙离子浓度下室温孵育 30 min，通过 SDS-PAGE 和 Western blot 验证异源二聚体是否形成。

    结果正确扩增出 hS100A8 和 hS100A9 基因，重组质粒pET28a-hS100A8 和 pET28a-hS100A9 构建成功，纯化后在室温孵育后可形成异源二聚体。

    结论hS100A8 和 hS100A9 蛋白可以在体外形成异源二聚体，为探讨其生物学作用奠定理论基础。

    钙粒蛋白 A； 钙粒蛋白 B； 基因表达

    hS100A8 和 hS100A9 属于 S100 家族的成员，是细胞内小分子量钙结合蛋白，在细胞内/外发挥多种生物学功能，在炎症相关癌变研究领域中作用机制多有研究，它们在癌变的起始、促进和演变的每一阶段均发挥着重要作用[1]。hS100A8 和hS100A9 在细胞内的表达具有组织特异性[2]，是髓系细胞分化过程中表达的具有免疫原性的蛋白质[3]，在粒细胞和单核细胞中的表达量较高，主要定位在胞浆，两者常以钙离子依赖方式形成异源二聚体hS100A8/A9[4]。hS100A8/A9 是细胞内发挥作用的主要形式[5]，起着促进细胞趋化反应、抗菌、抑制多种正常细胞(成纤维细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等)和肿瘤细胞(白血病细胞、淋巴瘤细胞、乳腺癌细胞等)生长的作用[6]。hS100A8/A9 作为重要的致炎介质参与急性、慢性炎症反应，在多种肿瘤细胞和浸润的免疫细胞中均有表达，具有致炎因子作用[7]。同时，可与多不饱和脂肪酸花生四烯酸(arachidonic acid ......