申佳佳，占跃晨，王燕，李会英，蒋建东，王真

    哇巴因对乳腺癌MCF7细胞能量代谢的影响研究

    申佳佳，占跃晨，王燕，李会英，蒋建东，王真

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所(申佳佳、占跃晨、李会英、蒋建东、王真)；100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院药物研究所(王燕、蒋建东)

    检测哇巴因对人乳腺癌 MCF7 细胞能量代谢的影响，初步探索相关作用机制。

    联合使用 ATP 检测系统及海马生化分析仪检测哇巴因作用后细胞内ATP 水平及线粒体呼吸作用的变化；使用葡萄糖氧化酶法检测哇巴因对 MCF7 细胞葡萄糖吸收水平的影响；使用 AMPK 活性检测探针检测 AMPK 活性的变化；通过 Western blot 实验初步检测哇巴因对 MCF7 细胞内相关激酶蛋白水平的影响。

    哇巴因能够时间依赖性地降低 MCF7 细胞内 ATP 水平，剂量依赖性地降低线粒体呼吸作用，同时 25 ~50 nmol/L 的哇巴因作用 24 h 后能够促进葡萄糖吸收。该化合物可激活 AMPK 活性，在 12 h 表现出最佳活性。Western blot 实验结果证实哇巴因能够升高 AMPK 和底物蛋白乙酰辅酶 A 羧化酶(ACC)的磷酸化水平，抑制 Na+/K+-ATP 酶 α1 亚型(NKAα1)的表达。

    哇巴因可抑制人乳腺癌 MCF7 细胞的线粒体氧化呼吸作用，促进糖酵解。哇巴因对肿瘤代谢的影响可能与其调控 AMPK 活性有关。

    哇巴因； 糖酵解； 乳腺癌细胞； 线粒体氧化呼吸

    洋地黄类药物作为细胞内 Na+/K+-ATP 酶(NKA)的特异性配体，在临床上广泛应用于心力衰竭和心律失常的治疗[1]。研究发现，洋地黄类药物还可抑制肿瘤细胞生长[2]，长期服用洋地黄类药物能够抑制肿瘤的发生及发展[3]。哇巴因(ouabain，OUA)作为洋地黄类药物家族成员之一，不仅可以通过激活 NKA，引起细胞内钙离子的释放，激活心肌细胞代谢系统[4]，还能够通过抑制 DNA 拓扑异构酶的活性以及诱导细胞自噬及凋亡等，降低肿瘤细胞的增殖能力和细胞迁移能力[5-7]。另有研究发现，哇巴因能够拮抗雌激素受体，抑制乳腺癌细胞 MDA-MB-231 增殖[8]。我们的前期研究发现，哇巴因和地高辛可通过激活 AMPK/mTOR 和 Src/ERK1/2 双重信号通路诱导肿瘤细胞发生自噬性死亡[9-10]，本文拟从调控肿瘤细胞代谢的角度探索哇巴因的抗肿瘤活性。

    1 材料与方法 ......