段丽娟，李育合，谢小荣，孟祥玉，戴于栋，金学敏，高建军

    胰酶激活的E型肉毒毒素及其类毒素免疫原性研究

    段丽娟，李育合，谢小荣，孟祥玉，戴于栋，金学敏，高建军

    730046 兰州生物制品研究所有限责任公司血清室

    胰酶激活 E 型肉毒毒素，并研究其类毒素免疫原性。

    胰酶激活 E 型肉毒毒素，脱毒后制备类毒素，免疫家兔，与常规方法制备的 E 型肉毒类毒素比较免疫原性。

    胰酶激活 E 型肉毒毒素的最佳条件为胰酶浓度0.5%、激活时间 45 min、pH 6.0、温度37 ℃，在此条件下可提高毒素毒力 1000 倍，但其类毒素免疫原性与常规方法无显著性差异。

    胰酶激活 E 型肉毒毒素，可大幅度提高毒素毒力，但并未改变其免疫原性。

    胰酶； 类毒素类； 免疫原性； E 型肉毒毒素

    肉毒毒素(botulinum toxin)是由厌氧的肉毒梭菌(clostridium botulinum)在生长繁殖过程中产生的一种细菌外毒素，它能引起以运动神经麻痹症状为主的死亡率极高的中毒性疾病。肉毒梭菌及其毒素根据毒素抗原性的不同，可分为 A、B、C、D、E、F、G 七个型。其中 A、B、E 是人类罹患肉毒中毒的主要型别，F 型仅有少数几起人中毒的报道，而 G 型至今尚无致人中毒的确凿证据。C、D 型除个别病例外，主要是牲畜和禽类中毒的病原[1]。在我国，E 型肉毒中毒在青海省等青藏高原地区多有发生，中毒症状一般为视觉模糊、呼吸困难、眼睑下垂、吞咽困难及全身乏力等[2-3]。对于肉毒毒素中毒的治疗，通常用抗毒素来中和。由于抗毒素与毒素的结合具有严格的特异性，因此 E 型肉毒中毒只能用特异性的 E 型肉毒抗毒素来进行治疗。由于高品质的抗毒素依赖于免疫原性较高的抗原免疫动物后获得的高效价的免疫血浆，因此，制备高免疫原性的免疫原是提高抗毒素质量的前提条件之一。

    E 型肉毒梭菌及其毒素具有与其他型别不同的生物特性与多样性[4-5]，在其生产过程中会出现毒力值较低的情况，导致免疫动物后血浆免疫效价不理想。为制备具有高免疫原性的 E 型肉毒免疫原，需探索不同方法优化其毒素、类毒素的制备过程。本实验通过加入一定量的胰酶，对毒素蛋白进行激活的方法制备 E 型肉毒毒素，脱毒后免疫动物，研究其免疫原性。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 菌种及培养基 实验用 E 型肉毒梭菌菌种(批号：WS-E20110901)、多价肉毒毒素诊断血清和 E 型肉毒梭菌培养基分别由本公司毒素制剂室和培养基室提供 ......