李佳

    FABP-5基因沉默对肝癌Bel-7402细胞生物学特性及人参川穹嗪敏感性的影响

    李佳

    110016 沈阳，辽宁电力中心医院消化内科，lijiaxhnk@ 163.com

    探讨通过 siRNA 干扰技术沉默表皮脂肪酸结合蛋白-5(FABP-5)基因表达对人肝癌 Bel-7402 细胞生物学特性及人参川穹嗪敏感性的影响。

    以人肝癌 Bel-7402 细胞为研究对象，根据 FABP-5 mRNA 编码序列设计并合成干扰 siRNA 序列，瞬时转染 Bel-7402 细胞。将人肝癌 Bel-7402 细胞分为 FABP-5 siRNA 组、阴性对照组、空白对照组。用 RT-PCR 和 Western blot 法分别从 mRNA 水平和蛋白水平检测 FABP-5 基因的表达；CCK8 法测定细胞体外增殖能力；流式细胞技术检测各组细胞周期和凋亡的变化情况；细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力；MTT 法观察 FABP-5 基因沉默后 Bel-7402 细胞对人参川穹嗪的敏感性。

    RT-PCR 和 Western blot 显示，FABP-5 siRNA 组较阴性对照组和空白对照组的FABP-5 mRNA 和蛋白表达都明显下降；FABP-5 siRNA 组细胞的生长速度明显减慢，细胞周期阻滞在 G0/G1期，S 期细胞数减少；与阴性对照组和空白对照组相比，FABP-5 siRNA 组细胞的凋亡率明显升高(1 材料和方法

    1.1 主要材料

    人肝癌 Bel-7402 细胞购自上海拜力生物科技有限公司；胰蛋白酶及 ECL 化学发光试剂盒购自美国 Thermo 公司；DMEM/F12 培养基购自美国 Gibco 公司；Opti-MEM 和 G418 购自美国 Gibco BRL 公司；胎牛血清(FBS)购自上海四季青公司；脂质体转染试剂 Lipofectamine2000TM和 Trizol 购自美国 Invitrogen 公司；RT-PCR 检测试剂盒购自上海宝曼生物科技公司；AMV 反转录试剂盒购自杭州博日科技有限公司；cDNA 合成试剂盒和 RNA 干扰引物购自北京赛百盛生物科技公司；PCR 引物序列由上海吉尔生化有限公司合成；CCK8 购自北京博奥森生物技术有限公司；兔抗人 FABP-5 抗体购自美国 Abcam 公司；HRP 标记的羊抗鼠 IgG 购自美国 Abcam Santa 公司；鼠抗 GAPDH 抗体购自美国 Cruz 公司；HRP 标定的兔抗羊 IgG 购自福州迈新生物科技公司；PVDF 膜购自美国Bio-Rad 公司；RIPA 蛋白裂解液及 BCA 蛋白标定检测盒购自江苏碧云天公司；Matrigel gel购自美国 BD 公司；人参川芎嗪注射液购于安徽天洋药业公司(人参与川芎嗪按 9:1 配置) ......