靳爱军，胡凌飞，张柯，杜涛，刘波波，李劲松，李娜

    近年来，由于新发再发传染病如 SARS、甲型H1N1 流感、结核、埃博拉等高致病性空气传播传染病的暴发[1-3]，相关的实验活动日益频繁，实验室安全风险也极大增加。生物安全三级(biosafety level 3，BSL-3)实验室是为开展与第二类病原微生物相关的实验而设计建造的，其中气溶胶的形成与传播是造成生物污染与人员感染的最主要途径[4]，对实验活动与意外事故产生的气溶胶进行定量研究是实验室生物污染风险评估的重要内容。本文对BSL-3 实验室中 6 种实验活动意外事故产生的气溶胶进行定量研究，分析造成的生物污染风险，为实验室实验活动的风险评估及相应的人员防护措施等提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    粘质沙雷菌(8039)为军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所保藏；大肠埃希菌(ATCC 13706)及其噬菌体 ΦX174(ATCC 13706-B1)购于 ATCC 菌种保藏中心。采用普通营养琼脂培养基(TSA)、普通营养琼脂半固体培养基和营养肉汤培养基培养。Andersen 空气微生物采样器购自青岛众瑞智能仪器有限公司；0.85% 生理盐水采样管购自友康恒业生物科技(北京)有限公司。一次性环氧乙烷灭菌培养皿(直径 90 mm，倾注普通营养琼脂培养基)。

    1.2 方法

    本研究模拟的实验操作均在正常运行的BSL-3 实验室的生物安全柜外进行，实验过程保持温度 26 ℃，湿度 76%，压力 –93 Pa。每次实验操作之前首先使用 Andersen 二级空气微生物采样器对环境本底进行采样，作为空白对照，以确定环境中是否存在替代微生物。

    实验中粘质沙雷菌的浓度为 4.68 × 109CFU/ml和 4.68 × 107CFU/ml，噬菌体 ΦX174 的浓度为1.32 × 108PFU/ml 和 1.32 × 107PFU/ml。表面采样使用无菌棉拭子蘸取灭菌生理盐水在采样表面均匀涂抹 5 cm × 5 cm 的方形区域 5 次[5]，将采样后的拭子放入生理盐水管中，充分混匀振荡使采集到的微生物充分释放。吸取 1 ml 的采样液直接滴加至平皿中充分混匀，然后对采样平皿进行培养。每平方厘米的微生物数为 M = N·F·D/A，其中 N 为平皿培养之后的菌落数(或噬菌斑数)；F 为采样管内液体总体积；D 为稀释倍数；A 为采样涂抹面积。每次实验后喷洒 75% 的酒精溶液和紫外灯彻底消毒灭菌 ......