张增增，郝春香，郭维民，陈明学，王振勇，张学亮，李旭，荆晓光，刘雪剑，孙百川，郝立波，眭翔，刘舒云，郭全义，周成福

    半月板是胫股关节的必要组成部分。由于半月板自身结构的特异性，损伤后难以再生，尤其是内侧白白区[1]。目前可吸收的生物来源支架已经被广泛用于半月板的修复和再生，如美国的胶原半月板假体[2]。I 型胶原是半月板的主要基质成分，因此，我们探索用 I 型胶原蛋白组成的血管组织制备组织工程半月板支架的可行性。传统的脱细胞方法有物理程序法、化学洗涤剂法和酶消化法[3]。这些方法单一的运用，难以达到预期的抗原去除效果。本文采用三联抗原去除程序制备脱细胞血管基质，并对比分析其与半月板在结构和成分上的差异，是国内首次探讨脱细胞血管基质支架作为组织工程半月板支架的可行性实验研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要材料及试剂 新鲜牛大动脉购自北京市屠宰场，共 10 个牛心管；3 月龄的健康新西兰白兔 10 只，由解放军总医院实验动物中心提供。所有动物实验方案均经解放军总医院伦理委员会批准。十二烷基硫酸盐(SDS)购自北京化学试剂公司；三羟甲基氨基甲烷(Tris)购自北京科昊达生物公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)和 DNase 酶为美国 Sigma 产品；RNase 酶购自美国 Thermo公司；羟脯氨酸定量试剂盒购自南京建成科技有限公司。

    1.1.2 主要仪器 THZ-95 型台式恒温振荡培养箱购自北京四环科学仪器厂；80 ℃ 深低温冰箱为日本 Sanyo 公司产品；JSM-6700F 型扫描电镜为日本 JEOL 公司产品；BB5060 型 CO2培养箱为德国 Heraeus 公司产品；冰冻切片机为日本 Leica公司产品；BH-2 型倒置显微镜、IX 70 型荧光显微镜、多功能显微镜均为日本 Olympus 公司产品；生物力学试验机为美国 Bose 公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 脱细胞血管基质的制备 新鲜获取的牛大动脉，剪裁成 4 mm × 8 mm × 2 mm 的片状，置于无菌的容器内，3% 的双氧水漂洗 3 次，每次 0.5 h。将双氧水倒尽，以无菌 PBS(pH 7.2 ～ 7.4)清洗3 次，每次 10 min。将血管置于三蒸水(低渗溶液)中进行 –80 ℃ 冷冻 2 h，然后 37 ℃ 水浴复温 15 min，无菌三蒸水清洗 3 次，如此进行反复冻融 3 次后，在无菌操作台用无菌眼科钻切割成兔子半月板大小，置于 2% SDS(内含蛋白酶抑制剂)溶液中 ......