施敏，马晓彤，曹学丽，裴海闰，韩天，郑积敏

    芍药是我国传统的中药材，具有多种药理作用[1]，广泛应用于保健食品、医药等领域[2]。芍药内酯苷和芍药苷是其中主要的活性成分[3]，但两者在药理作用上有较明显差别[4]。芍药内酯苷具有抗抑郁作用[5]，在促进睡眠、保护脑神经的药理活性甚至超过了芍药苷[6]，此外其在镇痛、镇静、抗惊厥、调节免疫力、舒张平滑肌、抗炎、杀灭病原微生物和保护肝脏方面具有显著作用[7]。芍药苷和芍药内酯苷互为同分异构体[8]，且在大多数芍药品种中，芍药苷的含量显著高于芍药内酯苷[9]。在芍药内酯苷抗抑郁药物的研发中，不仅需要采用高效的分离手段对两者进行分离，分离出来的芍药苷弃之不用造成资源的大量浪费[10]。所以，我们想到如果能利用微生物转化的方法将芍药苷转化为芍药内酯苷，一方面可以降低双苷分离的难度，另一方面可以极大地提高资源的综合利用度。目前，这方面的研究较少，刘鑫鑫等[11]曾对芍药苷和芍药内酯苷的微生物转化进行过初步研究。从 18 种真菌中筛选出分别对芍药苷和芍药内酯苷具有转化能力的菌株，其中短刺小克银汉霉(Cunninghamella blakesleeanaAS 3.910)、雅致小克银汉霉、华根霉可以将芍药苷转化为芍药内酯苷，但并没有深入研究各个菌种的转化能力。本研究在此基础上，就真菌短刺小克银汉霉转化芍药苷为芍药内酯苷的影响因素进行了系统考察，以芍药苷的转化率和芍药内酯苷的产率为考察指标，对转化工艺进行了优化。构建了较高效的微生物转化体系，提高了短刺小克银汉霉对芍药苷的转化能力，为进一步研究奠定了良好基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌种 短刺小克银汉霉干粉购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为 CICC40267。

    1.1.2 培养基 种子培养基：马铃薯提取液(取新鲜去皮马铃薯 200 g，切成小块，加水 1.0 L，煮沸 30 min，滤去马铃薯块，将滤液补至 1.0 L)1.0 L、葡萄糖 20.0 g、琼脂15.0 g、自然 pH，121 ℃ 灭菌 15 min，放置于干净的工作台中，常温冷却凝固。 基础培养基：马铃薯提取液 100 ml、葡萄糖 2 g、自然 pH，121 ℃ 灭菌 15 min[12]。

    1.1.3 底物 纯度为 96% 的芍药苷粉末由实验室自行制备，配制成 10 mg/ml 的底物甲醇溶液。

    1.1.4 试剂 马铃薯(市售)；葡萄糖、氯化钠、氢氧化钠、磷酸二氢钾均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司；无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、正己烷均为分析纯 ......