叶程，曹睿，宋文凭，李良，李毅，赵春燕，李亮，邵荣光

    双靶向配体化力达霉素DTLL的制备优化和稳定性研究

    叶程，曹睿，宋文凭，李良，李毅，赵春燕，李亮，邵荣光

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室/卫生部抗生素生物工程重点实验室

    通过对具有高效抗肿瘤活性的类抗体偶联药物—?双靶向配体化力达霉素(DTLL)制备过程的优化，获得纯度高和活性强的 DTLL 产品；探讨影响 DTLL 稳定性的主要因素，为临床申报和工业化生产提供依据。

    分别对 DTLL 前体(DTLP)蛋白表达载体、宿主菌株、表达温度、诱导剂终浓度、菌体密度和诱导时间进行优化。以高压破碎法提取可溶性目的蛋白，采用 Ni+亲和与分子筛层析两步纯化，得到高纯度 DTLP，再与力达霉素发色团组装获得 DTLL。采用 HPLC、MTS、ELISA 法进行稳定性试验，分别监测 DTLL 冻干样品的蛋白纯度、发色团含量、细胞毒和亲和力活性的变化。

    经过发酵提取工艺优化，每升发酵液所得 DTLP 蛋白约为 22 mg，是优化前每升9 mg 的 2.4 倍，其蛋白纯度达到 99.7%；DTLL 组装效率达到 68%；稳定性试验结果显示，DTLL 冻干样品对光照敏感，在–80 ℃低温避光环境下可稳定保存。

    成功优化了双靶向配体化力达霉素 DTLL 的制备工艺，提升了产品纯度和产率，为其后续生产和临床申报提供了实验基础，也为其他抗体偶联药物的制备提供了较成熟完善的技术平台。

    重组融合蛋白质类； 蛋白质稳定性； 制备工艺； 配体化力达霉素

    人类表皮生长因子受体(EGFR)家族参与激活细胞的增殖、分化和迁移等通路[1]。EGFR 和 HER2 是该家族中的重要成员，在肿瘤细胞过表达持续异常激活，可导致肿瘤的发生和发展。两者在多种肿瘤细胞中共表达，因此针对 EGFR 家族的靶向药物具有良好市场前景[2-3]。如抗体偶联药物(ADC)Kadcyla?作为 HER2 阳性乳腺癌的二线用药，治疗效果已得到广泛认可[4]。因此，ADC 或免疫融合蛋白等靶向药物的制备工艺研究同样备受关注。通过基因重组技术制备免疫融合蛋白的方法简单可行，可获得均一性抗体药物[5]。

    力达霉素(lidamycin，LDM)是由放线菌 Streptomyces globisiporus C-1027 提取的烯二炔类抗肿瘤抗生素，对肿瘤细胞具有强烈杀伤活性[6-7]。双靶向配体化力达霉素(DTLL)是在 LDM 辅基蛋白结构基础上 ......