王辉强，刘尚裕，李玉环

    应用2周龄ICR小鼠建立CVA16感染模型

    王辉强，刘尚裕，李玉环

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所病毒室

    Enterovirus 71(EV71)和 coxsackievirus A16(CVA16)都属于小核糖核酸病毒科的单正链 RNA 病毒，是引起手足口病的两个主要病原体[1]。临床上，这两种病毒的感染通常是自限性的，小部分感染常与神经系统疾病相关，包括无菌性脑膜炎、脑干脑炎和急性弛缓性麻痹等[2]。手足口病已成为一个严重的公共卫生问题，在日本、马来西亚、新加坡、越南、中国大陆等亚太地区存在周期性的爆发流行[3-5]。目前临床上尚无有效的抗病毒药物用于手足口病的预防和治疗。

    抗病毒药物和疫苗的研发依赖于体内外筛选模型的建立，目前国内外CVA16 的动物模型主要是 1 周龄以内的乳鼠模型，但是利用 1 周龄以内的乳鼠进行抗病毒实验操作难度较大，给药途径和给药容量明显受限，而且 1 周龄以内的乳鼠免疫系统发育尚不完善，在进行药物体内药效评价时有一定的局限性[6]。有研究报道，利用干扰素 α/β 和 γ 受体缺陷型小鼠(AG129)适应传代获得的 CVA16 毒株可以感染 12 周龄的 AG129 小鼠，但是该模型缺乏干扰素应答，对于通过调节先天免疫发挥抗 CVA16 作用的药物无法评价其体内药效，并且相对于常用的 ICR 等小鼠，AG129 小鼠的实验成本会增加[7]。本实验室通过将 CVA16 的临床分离株在 ICR 乳鼠上的逐渐适应传代成功建立了 2 周龄 ICR 小鼠的感染模型，采用细胞病变(CPE)法测定感染小鼠心、脾、肺、肾、小肠、脑和肌肉组织的 CVA16 病毒滴度，并利用 Western blot 方法检测各组织中 CVA16 蛋白的表达。另外，利用该模型初步评价抗病毒药物利巴韦林(RBV)的体内抗 CVA16 的药效。该模型的建立可以更好地服务于抗 CVA16 药物和疫苗的研发，也可进行 CVA16 发病机制的研究。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 孕龄 17 ~ 18 d 的 ICR 小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司[SCXK(京)2012-0001]，待小鼠分娩后记录乳鼠日龄，根据国家科学委员会设立的指导方针，按实验动物使用的 3R 原则给予人道的关怀。

    1.1.2 细胞和病毒 Vero 细胞为本室自行传代保存。CVA16(shzh05-1/GD/CHN/2005)由中国疾病预防控制中心提供 ......