王浩，杨月峰，胡泽斌，王华，肖凤君，王立生

    乳腺癌是最为常见的女性恶性肿瘤之一，在美国，乳腺癌占女性癌症死亡率的第二位；而我国乳腺癌的发病率位居女性癌症发病率之首[1-2]。晚期乳腺癌患者往往会发生骨转移，严重影响患者的生活质量和预期寿命。2015 年 10 月，美国 FDA批准了携带粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)的单纯疱疹溶瘤病毒上市，基因治疗和溶瘤病毒治疗成为肿瘤治疗研究的热点[3]。本实验室长期从事溶瘤腺病毒的基础研究，研发了多种溶瘤腺病毒载体[4-8]。其中，携带可溶性转化生长因子(transforming growth factor β，TGF-β)受体 II-人IgGFc 融合蛋白(sTGFβRIIFc)的溶瘤腺病毒Ad.sT，可有效抑制乳腺癌(MDA-MB-231)骨转移的进展[4]。但是，对于 sTGFβRIIFc 基因的体内免疫调节作用与机制尚未做系统分析。

    在具有完全免疫系统的乳腺癌细胞 4T1 移植瘤模型中，采用瘤内给药方式给予携带sTGFβRIIFc 基因的复制缺陷型腺病毒 Ad(E1-).sT和对照病毒 Ad(E1-).Null 进行治疗，明确Ad(E1-).sT 的治疗效果；研究 Ad(E1-).sT 对小鼠血象的调控作用；分析 Ad(E1-).sT 对小鼠外周血T 淋巴细胞亚群和小鼠脾脏树突状细胞(dendritic cells，DCs)的激活效应。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系 小鼠乳腺癌细胞 4T1 购自美国ATCC 公司，培养于 10% 胎牛血清(FBS)的 1640培养基中。

    1.1.2 重组腺病毒 携带可溶性 TGF-β 受体 II-人 IgGFc 融合蛋白(sTGFβRIIFc)的复制缺陷型重组腺病毒 Ad(E1-).sT 和不携带外源基因的对照病毒 Ad(E1-).Null 均由本实验室采用 Adeasy 系统制备获得。大量扩增获得的病毒原液，经氯化铯密度梯度离心，获得高质量的病毒，其颗粒滴度大于 1 × 1012VPs/ml，纯度(OD260/OD280)在 1.25 ～1.45 之间。

    1.1.3 实验动物 动物模型为小鼠皮下移植瘤模型，4 ～ 6 周龄、雌性、BALB/c 小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证编号为：SCXK(京)2012-0001，饲养于军事科学院军事医学研究院动物房 ......