陈世明，董文心，章瑾，宣丹英，顾丰华，毛钟鸣，陈婕美，陈嘉，刘翔，陈鹏翾，赵烨

    帕金森病(Parkinson's disease，PD)是一种发生在中老年期常见的神经系统变性疾病，以中脑黑质多巴胺能(dopamine，DA)神经元变性坏死和纹状体区多巴胺能神经元水平减少为主要病理特点[1]。目前临床上的治疗方法都只能改善症状，无法阻止病情的发展。因此一些细胞移植的创新疗法成为近年来研究热点[2-3]。

    人神经干细胞(human neural stem cells，hNSCs)存在于神经系统中，是一类具有自我更新复制，能分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞的多潜能干细胞[4-5]。神经干细胞通过体外扩增培养，移植到病人体内，向神经系统病变部位趋行、聚集，并存活、增殖、分化为神经元和胶质细胞，从根本上补充缺失和缺损的多巴胺能神经元，成为治疗神经系统损伤和神经退行性疾病的新方法[6-7]。但由于技术原因，神经干细胞在体外培养存在易分化和易死亡的技术难题[8-9]，目前获取途径主要是从胚胎或流产胎儿中分离并进行有限的扩增培养，这样的神经干细胞来源混杂，无法达到标准化，且存在着伦理问题。因而如何确保神经干细胞来源稳定、标准、用之不竭成为临床治疗帕金森病的关键[10-11]。本研究从流产胎儿中分离神经干细胞，在体外长期规模化培养和扩增，并探讨是否能改善帕金森模型大鼠旋转行为及其移植后脑内存活和分化情况，解决临床上人神经干细胞治疗帕金森病细胞来源困难这一关键问题。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂 DMEM/F-12(1∶1)培养基购自美国 Hyclone 公司；重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)、重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)、N2 神经细胞生长添加剂、B27、胰酶(TP-EDTA)均购自美国 Gibco 公司；6-羟基多巴胺(6-OHDA)、阿扑吗啡购自美国 Sigma 公司；水合氯醛、抗坏血酸购自国药集团化学试剂有限公司；胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司。

    1.1.2 实验动物 健康雄性 Wistar 大鼠 120只，体重约 300 g ......