洪恩宇，王雅頔，任慧敏，耿迪，杨慧，郑惠文，杨业然，金雅琼，鲁洁，郭永丽，于永波

    作者单位：100045 北京，国家儿童医学中心(北京)首都医科大学附属北京儿童医院/北京市儿科研究所/儿童耳鼻咽喉头颈外科疾病北京市重点实验室(洪恩宇、王雅頔、任慧敏、耿迪、杨慧、郑惠文、杨业然、金雅琼、鲁洁、郭永丽、于永波)，儿童临床数据和样本资源库(洪恩宇、王雅頔、任慧敏、耿迪、杨慧、郭永丽、于永波)

    在临床和科研工作中，血液和组织是比较容易获取的生物标本，特别适用于临床和实验室检测及生物样本库收集保存。DNA、RNA 和蛋白质是三种重要的生物大分子，其中RNA 在人类多种生理和病理过程中发挥着举足轻重的作用。RNA 通常是从组织、全血和培养的细胞中提取获得[1]，高质量 RNA 可满足 RT-PCR、Northern blot、基因表达谱、转录组测序和阵列分析等生物学实验的研究需求[2-3]。由于RNA 自身结构特性[4]和环境中广泛分布核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)[5]，同时 RNA 提取质量亦受到标本类型、储存温度、储存时间、冻融次数和处理方式等影响，使得从血液、组织和培养的细胞中抽提 RNA 以及 RNA的稳定保存相对困难。

    目前，有关 RNA 质量的影响因素研究主要集中于样本类型、储存温度和时间等方面，但是储存温度和时间对 RNA的影响仍然没有统一的结论[6-7]，而且，RNA 反复冻融对其质量的影响也未见报道。本文从临床检测和临床资源样本库标本存储的需求出发，旨在探讨血液标本采集后在 4 ℃ 及常温放置不同时间，评估其对血液标本 RNA 质量的影响；另外，通过反复冻融 RNA，研究 RNA 冻融次数对其质量影响，以期为临床检测和样本库标本的存储提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要设备 生物安全柜和 NanoDrop 购自美国Thermo 公司；4 ℃ 和 –80 ℃ 冰箱购自 Sanyo 公司；高速冷冻离心机和恒温混匀仪购自 Eppendorf 公司；G2939A生物分析仪购自 Agilent 公司；采血管购自美国 BD 公司；RNase free 离心管和枪头购自美国 Axygen 公司；RNase free 冻存管购自德国 Sarstedt 公司。

    1.1.2 主要试剂 血液(液体样本)总 RNA 快速提取试剂盒(离心柱型)购自北京百泰克生物技术有限公司；AllPrep DNA/RNA Mini Kit 购自美国 Qiagen 公司；RNA 6000 Nano 总 RNA 分析试剂盒及芯片购自美国 Agilent公司；氯仿和 β-巯基乙醇等试剂购自国药集团化学试剂有限公司 ......