崔亮亮，李秀琳，李秀娜，丁忠福，石皎，孙东，薛雁

    作者单位：110171 沈阳，辽宁远大诺康生物制药有限公司

    蛇毒中含有多种能够影响哺乳动物凝血系统的酶类，这些酶类与凝血机制级联放大反应中的各个凝血因子之间有比较严格的专一性作用，其中凝血因子 X 激活剂(coagulation factor X activator，FXA)是一种能够直接作用于凝血因子 X(coagulation factor X，FX)的具有蛋白水解酶特性的酶类，在蝰亚科、蝮亚科、眼镜蛇科等蛇毒中分布广泛[1]。人体正常的血液系统处于促凝-抗凝之间的动态平衡，当机体受到外源伤害或疾病干扰时，机体的凝血平衡被打破，启动凝血瀑布级联放大反应以抵抗外来因素的影响。然而无论是外源凝血途径还是内源凝血途径，最终均是凝血因子 FX 被激活为活化状态，即活化的凝血因子 X(coagulation factor X activated，FXa)，FXa 激活凝血酶原生成凝血酶，发挥凝血作用[2]。巴西矛头蝮蛇蛇毒中分离得到的凝血因子 X 激活剂，为分子量 80000 D 左右的单一组分的糖蛋白，含有一条重链和两条轻链，具有钙离子依赖性。体外研究表明，在 Ca2+存在的条件下 FXA 可以特异性地水解 FX 生成 FXa，近而使人-枸橼酸血浆凝固[3-4]。体内试验研究表明，FXA 可明显缩短正常小鼠的断尾出血时间，具有较好的止血作用，鉴于 FXA 高度特异性作用特点，初步判断对 A 型血友病小鼠也会有较好的止血效果[5]，可缓解目前临床仅靠补充凝血因子 VIII 治疗 A 型血友病的局面，降低患者的经济负担，具有较好的药物经济学价值。

    目前，根据作用底物的不同可将 FXA 的活性测定方法分为两大类：第一大类为天然底物法，即以人血浆为底物，以 FXA 加入血浆发生凝固的时间来进行 FXA 的活性测定。该法在 20 世纪 80 年代初得到普遍应用，方法常规[6]。第二大类为生色底物法，即通过 FXa 水解生色底物产生有特征吸收的生色产物进行的活性测定，又可分为二步法和FXA 外标法。二步法即在 FXA 作用于 FX 一段时间后加入终止剂，同时加入生色底物，根据特定时间内 FXa 的生成量计算 FXA 的活性[7]。FXA 外标法，通过检测 FXA 标准品不同浓度在 405 nm 处对硝基苯胺(pNA)的吸光度，绘制标准曲线计算待测样品效价。我们建立的方法是以 FX为反应底物，FXA 激活 FX 生成 FXa，FXa 水解生色底物生成在 405 nm 波长有最大吸收显黄色的对硝基苯胺 ......