王蓉，李良，张胜华，甄永苏，苗庆芳

    抗人CD30单克隆抗体的制备和活性研究

    王蓉，李良，张胜华，甄永苏，苗庆芳

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室

    制备抗人 CD30 单克隆抗体并进行活性研究，为其作为抗体偶联药物的靶向运输载体提供研究依据。

    通过基因工程技术构建真核表达载体 pIZDHL-CD30-IgG，将质粒稳定转染 CHO/dhFr-细胞并筛选，获得稳定表达 anti-CD30-IgG 抗体的细胞株并纯化抗体，通过 HPLC 检测其纯度。ELISA、Biacore 和流式细胞术实验检测 anti-CD30-IgG 的亲和活性；免疫荧光共聚焦实验观察其在肿瘤细胞的内吞情况；利用小动物活体成像技术研究抗体在 NOD/SCID 鼠移植瘤模型中的靶向性。

    成功构建了 anti-CD30-IgG 抗体的表达载体，并筛选出稳定表达的单克隆细胞株 CHO-CD30-IgG，纯化后的抗体 anti-CD30-IgG 纯度达到 98% 以上。Anti-CD30-IgG 与重组人 CD30 抗原具有很好的亲和活性，亲和常数为 4.15 × 108L/mol，其可通过肿瘤细胞表面 CD30 受体介导的内吞进入细胞。在 NOD/SCID 小鼠 L540 和 Karpas299 移植瘤模型中，anti-CD30-IgG 可以选择性地富集并滞留在肿瘤部位。

    Anti-CD30-IgG 对抗原和肿瘤细胞具有高亲和性和特异性，并且可被内吞进入肿瘤细胞内部，在小鼠体内可选择性靶向并且长时间滞留在肿瘤部位，可作为抗体偶联药物中“弹头”部分的靶向输送载体。

    抗原，CD30； 抗体，单克隆； 霍奇金病； 大细胞，间变性

    霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)和间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma，ALCL)是恶性血液肿瘤且在青少年中发病率较高。随着化疗、放疗等一线治疗技术的发展，HL 和 ALCL 治疗取得了重大进展，但仍有约 10% 的 HL 患者和 40% ~ 60% 的ALCL患者对一线治疗无应答或治疗后复发，需要接受自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem-cell transplantation，ASCT)[1-2]。虽然 ASCT 在复发性和难治性淋巴瘤的治疗中表现为较好的治愈率，但仍有约 50% 的患者经二次治疗后复发，后续治疗愈加困难[3]。因此 ......