邹丽辉，王萌，黄薇，张恩毅，肖飞，王玉梅

    一种高效制备人β2微球蛋白标准物质的方法和应用

    邹丽辉，王萌，黄薇，张恩毅，肖飞，王玉梅

    100730 北京，北京医院/国家老年医学中心/卫生部老年医学重点实验室(邹丽辉、黄薇、张恩毅、肖飞)，检验科(王萌)；100050 北京，中国食品药品检定研究院生物材料室(王玉梅)

    构建重组人 β2 微球蛋白表达体系，高效快速获取 β2 微球蛋白，为临床实验室检测参考物质的制备奠定基础。

    优化人 β2 微球蛋白序列，人工合成优化序列片段并与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至pRSF-Duet 载体以构建重组人 β2 微球蛋白表达质粒。使用大肠杆菌BL21(DE3) 对重组质粒进行诱导表达，TEV 蛋白酶切除 MBP，全自动生化仪测定 β2 微球蛋白浓度。对重组蛋白在 4 ℃和–20 ℃储存条件下的稳定性进行检测，对 β2 微球蛋白纯品与校准品的互通性进行分析。

    成功构建重组人 β2 微球蛋白表达质粒，异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)成功诱导重组蛋白表达，MBP-β2 微球蛋白(MBP-β2-MG)浓度可达 100 mg/L，β2 微球蛋白浓度可达 185 mg/L。在 4 ℃和 –20 ℃储存条件下监测 64 周，β2 微球蛋白稳定存在。β2 微球蛋白纯品与 RANDOX 生化校准品互通性良好。

    通过密码子优化，成功构建了重组 β2 微球蛋白的高效表达系统，β2 微球蛋白可溶性高，稳定性好，与国际通用校准品互通性好，可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。

    β2微球蛋白； 重组蛋白质类； 参考物质

    β2 微球蛋白是由淋巴细胞、血小板和其他大多数有核细胞产生的一种低分子量血清蛋白质，其分子质量为11 800，是由 99 个氨基酸组成的单链多肽。β2 微球蛋白广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中。正常人 β2 微球蛋白的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定，并且极易通过肾小球滤过膜，滤过的 β2 微球蛋白 99.9% 被近曲小管细胞重吸收和降解，不再返流入血。当肾小球或肾小管滤过功能受损，尿液和血清中的 β2 微球蛋白增高[1-2]。β2 微球蛋白的调控异常可直接参与癌细胞的发育，被认为是多种恶性肿瘤的预后指标[3-4]。临床上检测血或尿中的β2 微球蛋白浓度为临床肾功能测定、肾移植成活、糖尿病肾病、重金属镉、汞中毒以及某些恶性肿瘤的临床诊断提供较早、可靠和灵敏的指标。脑脊液中β2 微球蛋白的浓度检测对脑膜白血病也有提示作用。

    目前临床上测定β2 微球蛋白的方法有放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法等[5] ......